myc遺伝子産物による上皮細胞の形質転換とそれに伴う核骨格、細胞骨格の変化の解析

myc 基因产物对上皮细胞的转化及相关核骨架和细胞骨架变化的分析

基本信息

批准号：
61015024
负责人：
野瀬清
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015024/
关键词：
がん遺伝子形質転換 myc 上皮細胞増殖因子

项目摘要

放射線により試験管内形質転換したヒトセンイ芽細胞(CT-1)では、c-mycの発現が顕著に上昇していた。この細胞のc-myc遺伝子をクローン化し、構造を調べたが正常c-mycと同じであった。 CT-1細胞c-myc遺伝子のSmqIEcoRI断片をSV40またはマウスメタロチオネイン遺伝子の転写プロモーターに結合して発現可能なmyc組換体を作製した(pSV2CT-myc,pMKCTmyc)。-ネオマイシン耐性遺伝子と共に種々の培養細胞に導入し、細胞形質の変化を検討した。まずBalb/3T3細胞では、V-hasのみで低い頻度の形質転換が誘起されるが、pSV2CTmycを同時に導入すると形質転換の頻度が約5倍上昇し、形質転換細胞の形態がV-hasだけの場合とくらべ著しく紡錘形となった。しかし、mycだけでは形質転換しなかった。従ってc-mycの高発現はhasの機能と共役して細胞に作用し、恐らく細胞骨格のなかの微小管構造を変化させると考えられた。次に、マウス上皮細胞JB6,ラット上皮様細胞208Fおよびヒトセンイ芽細胞にpSV2CTmycを導入し、myc発現によるこれらの細胞の形質発現を検討した。 JB6 KMST-6では導入したmycの発現は見られたが、細胞形態は対照と全く差が認められなかった。しかし、208Fに導入した場合、mycの発現が高いクローンでは細胞形態の変化(上皮様から紡錘形)が見られた。抗アクチン抗体を用いた蛍光抗体法により、mycの発現は細胞骨格のミクロフィラメントの重合を変化させることが示された。さらに、208F細胞は上皮細胞増殖因子(EGF)により軟寒天内コロニーが形成されるがmycを導入したクローンではこのEGFに対する反応性が消失していた。この消失の機構は不明だが、少なくとも受容体の変化ではなく、刺激伝達系の変化と思われる。以上の変化とmyc発現との相関を直接的に証明するには発現量を調節するベクターを用いる必要がある。メタロチオネインプロモーターは効果が弱いことが判明した。

在人类衰老IV细胞（CT-1）中，C-MYC的表达显着增加，该细胞已通过辐射转化为体外。克隆该细胞的C-MYC基因并检查了结构，并且与正常的C-Myc相同。 CT-1细胞C-MYC基因的Smqiecori片段与SV40或小鼠金属硫蛋白基因的转录启动子结合，以产生表达的MYC重组剂（PSV2CT-MYC，PMKCTMYC）。 - 将它们与新霉素耐药基因一起引入各种培养的细胞，并研究了细胞性状的变化。首先，在BALB/3T3细胞中，仅使用V-HAS诱导低频转化，但是当同时引入PSV2CTMYC时，转化频率的增加约5倍，从而导致纺锤形形状的形态明显高于转化细胞仅在V-HAS中。但是，仅MYC并没有改变。因此，人们认为，C-MYC的高表达与细胞结合起作用，并可能改变了细胞骨架内的微管结构。接下来，将PSV2CTMYC引入小鼠上皮细胞JB6，大鼠上皮样细胞208F和人类鼻细胞中，并研究了MYC表达的这些细胞表达。尽管JB6 KMST-6显示了转染的MYC的表达，但对照的细胞形态没有差异。然而，当引入208F时，在MYC高表达的克隆中观察到细胞形态变化（流行与纺锤体形式）。抗肌动蛋白抗体的免疫荧光测定表明，MYC的表达会改变细胞骨架微丝的聚合。此外，由于上皮细胞生长因子（EGF），208F细胞形成软琼脂菌落，但是引入MYC的克隆中对EGF的反应性消失了。这种消失的机制尚不清楚，但它似乎至少是刺激传输系统的变化，而不是受体的变化。为了直接证明上述变化与MYC表达之间的相关性，必须使用调节表达水平的向量。金属硫硫蛋白启动子被发现较弱。