myc遺伝子産物による上皮細胞の形質転換とそれに伴う核骨格、細胞骨格の変化の解析

myc 基因产物对上皮细胞的转化及相关核骨架和细胞骨架变化的分析

基本信息

批准号：
61015024
负责人：
野瀬清
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015024/
关键词：
がん遺伝子形質転換 myc 上皮細胞増殖因子

项目摘要

放射線により試験管内形質転換したヒトセンイ芽細胞(CT-1)では、c-mycの発現が顕著に上昇していた。この細胞のc-myc遺伝子をクローン化し、構造を調べたが正常c-mycと同じであった。 CT-1細胞c-myc遺伝子のSmqIEcoRI断片をSV40またはマウスメタロチオネイン遺伝子の転写プロモーターに結合して発現可能なmyc組換体を作製した(pSV2CT-myc,pMKCTmyc)。-ネオマイシン耐性遺伝子と共に種々の培養細胞に導入し、細胞形質の変化を検討した。まずBalb/3T3細胞では、V-hasのみで低い頻度の形質転換が誘起されるが、pSV2CTmycを同時に導入すると形質転換の頻度が約5倍上昇し、形質転換細胞の形態がV-hasだけの場合とくらべ著しく紡錘形となった。しかし、mycだけでは形質転換しなかった。従ってc-mycの高発現はhasの機能と共役して細胞に作用し、恐らく細胞骨格のなかの微小管構造を変化させると考えられた。次に、マウス上皮細胞JB6,ラット上皮様細胞208Fおよびヒトセンイ芽細胞にpSV2CTmycを導入し、myc発現によるこれらの細胞の形質発現を検討した。 JB6 KMST-6では導入したmycの発現は見られたが、細胞形態は対照と全く差が認められなかった。しかし、208Fに導入した場合、mycの発現が高いクローンでは細胞形態の変化(上皮様から紡錘形)が見られた。抗アクチン抗体を用いた蛍光抗体法により、mycの発現は細胞骨格のミクロフィラメントの重合を変化させることが示された。さらに、208F細胞は上皮細胞増殖因子(EGF)により軟寒天内コロニーが形成されるがmycを導入したクローンではこのEGFに対する反応性が消失していた。この消失の機構は不明だが、少なくとも受容体の変化ではなく、刺激伝達系の変化と思われる。以上の変化とmyc発現との相関を直接的に証明するには発現量を調節するベクターを用いる必要がある。メタロチオネインプロモーターは効果が弱いことが判明した。

体外辐射转化的人头胚细胞（CT-1）中c-myc的表达显着增加。克隆了该细胞的c-myc基因并检查了其结构，发现它与正常的c-myc相同。将 CT-1 细胞 c-myc 基因的 SmqIEcoRI 片段连接至 SV40 的转录启动子或小鼠金属硫蛋白基因，以创建可表达的 myc 重组体（pSV2CT-myc、pMKCTmyc）。 -我们将新霉素抗性基因引入各种培养细胞中并检查细胞性状的变化。首先，在Balb/3T3细胞中，单独使用V-has以较低频率诱导转化，但当同时引入pSV2CTmyc时，转化频率增加约5倍，并且转化细胞的形态与与单独的V型相比，它明显变成了纺锤形。然而，myc 本身并不能引起转化。因此，认为c-myc的高表达与has的功能联合作用于细胞，并且可能改变细胞骨架内的微管结构。接下来，将pSV2CTmyc导入小鼠上皮细胞JB6、大鼠上皮样细胞208F和人成胆细胞中，并检查这些细胞由于myc表达而产生的表型表达。尽管在JB6 KMST-6中观察到导入的myc的表达，但与对照细胞形态没有观察到差异。然而，当引入 208F 时，在高 myc 表达的克隆中观察到细胞形态发生变化（从上皮型变为纺锤形）。使用抗肌动蛋白抗体进行的免疫荧光分析表明，myc 表达改变了细胞骨架微丝的聚合。此外，由于表皮生长因子 (EGF)，208F 细胞在软琼脂中形成集落，但 myc 转染的克隆失去了对 EGF 的这种反应性。这种消失的机制尚不清楚，但至少看起来是刺激传递系统的变化而不是受体的变化。为了直接证明上述变化与myc表达的相关性，需要使用调节表达水平的载体。发现金属硫蛋白促进剂的效果较差。