熱ショック・ストレス蛋白質の機能・発現機構とその制御

热激应激蛋白的功能、表达机制及其调控

• 批准号: 06282121
• 负责人: 野瀬 清
• 金额: $ 10.69万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06282121/
• 关键词: 熱ショック蛋白; シャペロン; 温熱療法

低分子熱ショック蛋白質(hsp27)の増殖における機能につき、発現ベクターを用いた解析からhsp27高発現は増殖を抑制する可能性が示唆された。hsp27の各種変異体を用い、この増殖抑制には燐酸化およびC-末端での凝集体形成が関与することが示された(野瀬)。分泌経路の阻害剤で細胞を処理し、hsp47とコラーゲンとの結合、解離部位はゴルジ体以降で解離することが明らかとなった。また、この結合解離定数は定常状態では10^<-7>程度であることを示した(中井)。hsp90はカゼインキナーゼIIの活性サブユニットαのヘパリン結合部位に結合し、複合体を形成することを明らかした。またSV40T抗原とhsp90との複合体の再構成に成功した(宮田)。生存率でみた温熱耐性の程度と、hsp40,hsp70の細胞内含量とはいずれもよく相関し、hsp40も温熱耐性の良いマーカーとなることを示した。また、hsp70とhsp40が複合体を形成していることが明らかとなり、これらがシャペロンとして機能することが示された(大塚)。極低磁場を培養細胞に負荷し、hsp70の発現を見たが、HeLa,CHO細胞いずれにおいても発現上昇は見られなかった。また、マウスの移植腫瘍に加温処理を行い、hsp70のレベルを見たところ腫瘍周辺部で顕著な上昇が見られた(平岡)。細胞内に存在する腫瘍壊死因子(TNFα)が、細胞を加温した時の熱ショック因子(HSF1)のHSEへの結合能を増強させ、その結果hsp72の発現を高めることを見い出した。HSF1の結合能の増強は、細胞内TNFが直接HSF1に作用するわけではないことが示されている(渡辺)。U937細胞から核抽出液を調整し、hsc70遺伝子転写調節領域のDNA断片と結合する蛋白因子を検索し、増殖状態で異なったゲルシフトバンドが検出された。蛋白因子を精製して解析した結果、共通の蛋白質(分子量71,62kDa)が検出された(丸野内)。マウスリンパ節からγδ型T細胞をクローニングし、Vδ6またはVδ5を発現する2種のクローンを得た。Vδ6T細胞はhsp65と反応し、Vδ5T細胞はMethA繊維肉腫に反応性を示し、その反応性は抗hsp65抗体で阻害された(吉開)。カテプシンLの転写制御において、通常条件ではSp1が関与するが、誘導時にはEgr-1が転写制御領域に結合することが示された(石堂)。

使用表达载体的分析表明，HSP27的高表达可能抑制小分子热休克蛋白的增殖（HSP27）。使用了HSP27的各种突变体，并表明C末端处的磷酸化和骨料形成参与抑制生长（鼻子）。据揭示了细胞用分泌途径的抑制剂处理，并且Hsp47与胶原蛋白的结合和高尔基体后的解离位点解离。此外，表明该键解离常数在稳态（Nakai）中约为10^<-7>。据表明，HSP90与酪蛋白激酶II的活性亚基α的肝素结合位点结合并形成复合物。此外，SV40T抗原和HSP90之间的复合物已成功地重构（Miyata）。在生存率和HSP40和HSP70的细胞内含量中看到的热阻力程度很好地相关，这表明HSP40也是热电阻的标志。还揭示了HSP70和HSP40形成复杂的，表明这些功能是伴侣（Otsuka）。将极低的磁场应用于培养的细胞上，并表达HSP70，但在HeLa或Cho细胞中均未观察到表达增加。此外，对小鼠进行温暖治疗，观察到HSP70的水平显示出肿瘤周围的显着升高（Hiraoka）。发现细胞中存在的肿瘤坏死因子（TNFα）增强了热休克因子（HSF1）在加热时HSE的能力，从而增加了HSP72的表达。 HSF1的增强结合能力已显示不直接影响HSF1（Watanabe）。从U937细胞调节核提取物，并搜索与HSC70基因转录调控区域中DNA片段结合的蛋白质因子，并在增殖状态下检测到不同的凝胶移位带。纯化并分析了蛋白质因子，并检测到共同蛋白质（分子量：71,62 kDa）（Marunouchi）。从小鼠淋巴结中克隆γδ型T细胞，以获得两个表达Vδ6或Vδ5的克隆。 Vδ6T细胞与Hsp65反应，Vδ5T细胞反应于甲型纤维肉瘤，其反应性受到抗HSP65抗体（Yoshikai）的抑制。在组织蛋白酶L的转录调控中，SP1在正常条件下涉及，但表明EGR-1在诱导过程中与转录调节区域结合（Ishido）。