酸化ストレスによる細胞増殖抑制の分子機構

氧化应激抑制细胞生长的分子机制

基本信息

批准号：
05268235
负责人：
野瀬清
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268235/
关键词：
過酸化水素 cDNA Zn-フィンガー

项目摘要

酸化ストレス応答遺伝子の分離を目的とし、過酸化水素誘導性遺伝子のcDNAクローニングを、マウス骨芽細胞(MC3T3)を用いてこれまで行ってきた。今回その過程で分離された興味ある新規遺伝子(HIC-5)の構造と機能の解析を行った。HIC-5cDNAは440個のアミノ酸からなる蛋白質をコードし、この蛋白質はN-末端にProに富む領域を持ち、C-末端にlin-11と相同性を示す7個のZn-フィンガーを持っていることから転写制御因子の一つと予想される。ペプチド抗体を用いた免疫沈降の結果、HIC-5蛋白質は核に局在することが示された。HIC-5遺伝子の塩基配列はマウスとヒトとの間で保存されていると考えられ、この遺伝子の発現は、v-rasで形質転換したNIH 3T3細胞および各種のヒト癌細胞株で著しく低下していた。逆に正常ヒト繊維芽細胞の若い細胞での発現は低く、加令し増殖を停止した細胞において上昇した。この増殖における機能を直接的に解析するため、HIC-5cDNAの動物細胞での発現ベクターを構築し、細胞への導入を行った。発現ベクターとしてネオマイシン耐性遺伝子を含むプラスミドを用い、MC3T3細胞および不死化ヒト繊維芽細胞(KMST-6)に導入してネオマイシン耐性コロニーの出現頻度を測定した。その結果、HIC-5の発現はコロニー形成率を低下させ、細胞増殖の抑制作用を持つことが示された。しかし、発現ベクターを細胞へマイクロインジェクションしてもDNA合成には影響せず、HIC-5遺伝子産物は細胞周期進行を制御するのではなく、分裂回数の計測に関与することが考えられる。現在HIC-5蛋白質が結合するDNA配列および核蛋白質の検索を行っている。

为了分离氧化应激反应基因，使用小鼠成骨细胞 (MC3T3) 进行了过氧化氢诱导基因的 cDNA 克隆。我们分析了在此过程中分离出的一个有趣的新基因（HIC-5）的结构和功能。 HIC-5 cDNA 编码由 440 个氨基酸组成的蛋白质，其 N 端有一个富含 Pro 的区域，C 端有 7 个与 lin-11 同源的 Zn 指，因此，预测它是一个。转录控制因子。使用肽抗体的免疫沉淀显示 HIC-5 蛋白定位于细胞核中。 HIC-5基因的碱基序列被认为在小鼠和人类之间是保守的，并且该基因的表达在NIH 3T3细胞和用v-ras转化的各种人类癌细胞系中显着降低。相反，在年轻的正常人成纤维细胞中表达量较低，而在衰老并停止增殖的细胞中表达量增加。为了直接分析在这种增殖中的功能，我们在动物细胞中构建了HIC-5 cDNA的表达载体并将其导入细胞中。以含有新霉素抗性基因的质粒作为表达载体，导入MC3T3细胞和永生化人成纤维细胞（KMST-6）中，测定新霉素抗性集落的频率。结果显示HIC-5表达降低集落形成率并抑制细胞增殖。然而，将表达载体显微注射到细胞中并不影响DNA合成，这表明HIC-5基因产物参与测量分裂次数而不是控制细胞周期进程。我们目前正在寻找 HIC-5 蛋白结合的 DNA 序列和核蛋白。