酸化ストレスによる細胞増殖抑制の分子機構

氧化应激抑制细胞生长的分子机制

基本信息

批准号：
05268235
负责人：
野瀬清
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05268235/
关键词：
過酸化水素 cDNA Zn-フィンガー

项目摘要

酸化ストレス応答遺伝子の分離を目的とし、過酸化水素誘導性遺伝子のcDNAクローニングを、マウス骨芽細胞(MC3T3)を用いてこれまで行ってきた。今回その過程で分離された興味ある新規遺伝子(HIC-5)の構造と機能の解析を行った。HIC-5cDNAは440個のアミノ酸からなる蛋白質をコードし、この蛋白質はN-末端にProに富む領域を持ち、C-末端にlin-11と相同性を示す7個のZn-フィンガーを持っていることから転写制御因子の一つと予想される。ペプチド抗体を用いた免疫沈降の結果、HIC-5蛋白質は核に局在することが示された。HIC-5遺伝子の塩基配列はマウスとヒトとの間で保存されていると考えられ、この遺伝子の発現は、v-rasで形質転換したNIH 3T3細胞および各種のヒト癌細胞株で著しく低下していた。逆に正常ヒト繊維芽細胞の若い細胞での発現は低く、加令し増殖を停止した細胞において上昇した。この増殖における機能を直接的に解析するため、HIC-5cDNAの動物細胞での発現ベクターを構築し、細胞への導入を行った。発現ベクターとしてネオマイシン耐性遺伝子を含むプラスミドを用い、MC3T3細胞および不死化ヒト繊維芽細胞(KMST-6)に導入してネオマイシン耐性コロニーの出現頻度を測定した。その結果、HIC-5の発現はコロニー形成率を低下させ、細胞増殖の抑制作用を持つことが示された。しかし、発現ベクターを細胞へマイクロインジェクションしてもDNA合成には影響せず、HIC-5遺伝子産物は細胞周期進行を制御するのではなく、分裂回数の計測に関与することが考えられる。現在HIC-5蛋白質が結合するDNA配列および核蛋白質の検索を行っている。

为了分离氧化应激反应基因，已经使用小鼠成骨细胞进行了过氧化氢诱导基因的cDNA克隆（MC3T3）。在此过程中，我们分析了分离的新型感兴趣基因（HIC-5）的结构和功能。 HIC-5 cDNA编码由440个氨基酸组成的蛋白质，该蛋白在N端具有富含富含的区域，在C末端具有与LIN-11同源性同源性的七个Zn-Fingers，使其成为预测的转录调节因子。使用肽抗体的免疫沉淀表明HIC-5蛋白定位于细胞核。 HIC-5基因的核苷酸序列被认为是在小鼠和人之间保守的，并且在V-RAS转化的NIH 3T3细胞和各种人类癌细胞系中，该基因的表达显着降低。相反，正常的人类成纤维细胞在较年轻的细胞中较低，并且在被施用并停止增殖的细胞中升高。为了直接分析这种增殖中的功能，构建了动物细胞中HIC-5 cDNA的表达载体并引入细胞中。含有新霉素耐药基因的质粒用作表达载体，并被引入MC3T3细胞中，并将其永生化的人成纤维细胞（KMST-6）测量新霉素抗性菌落的频率。结果表明，HIC-5的表达降低了落形成率，并对细胞增殖具有抑制作用。但是，将表达向量的显微注射不影响DNA的合成，并且认为HIC-5基因产物不能控制细胞周期的进展，而是参与测量分裂的数量。目前，我们正在寻找HIC-5蛋白结合的DNA序列和核蛋白。