免疫担当細胞の活性化と発癌抑制の研究

免疫活性细胞活化及抑制癌变的研究

基本信息

批准号：
06283204
负责人：
高津聖志
金额：
$ 23.04万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は免疫担当細胞の発生・分化、活性化機構を明らかにし、それを攪乱する要因を明らかにするとともに、その制御法を開発し、ウイルス発癌の動物モデルを用いて個体レベルで発癌抑制を試みる。(研究方法と研究効果)(1)マウスレトロウイルス(LP-BM5 MuLV)感染による免疫不全症候群(MAIDS)の発症機構を解析する目的で、MAIDS発症が遅延する伴性免疫不全マウス(XID)の骨髄の移植によるMAIDS発症の抑制効果を調べた。ウィルス感染マウスXIDマウスの骨髄細胞を移植することでMAIDS発症を抑制できることを初めて明らかにした。(2)XIDマウスはブルトン型チロシンキナーゼ(Btk)に-アミノ酸変異がある。MAIDS発症遅延とBtkの異常の関連を明らかにするために野生型及びXID型Btkのトランスジェニックマウスを作製した。解析の結果、導入遺伝子由来のBtkが活性を有すること、野生型Btkを導入したXIDマウスではXIDマウスでは欠損しているCD5陽性B細胞が部分的に回復し、その脾臓B細胞はXIDマウスでは応答しない抗CD38抗体とIL-5の共刺激に対して有意な応答を示した。(3)IFNγ-R遺伝子欠損マウスではMAIDSの発症が遅延することを明らかにし、病態形成にIFNγが重要な役割を持つことを示した。(4)IL-5応答性株化細胞を用いて、IL-5刺激によりBtk、JAK1、JAK2キナーゼのチロシンリン酸化および活性化とJAKキナーゼの基質の一つであるSTAT5の活性化が惹起されることを明らかにした。また、これらの活性化にIL-5Rαの細胞内のプロリン残基に富む領域(Pro-Pro-X-Pro)が必須であることを初めて示した。(5)IL-5Rαの染色体遺伝子にネオマイシン耐性遺伝子とチミヂンキナーゼ遺伝子を導入したベクターを胚性幹細胞(ES)に導入し、変異ES細胞を選択した。それを用いて常法によりIL-5Rα遺伝子欠損マウスの作製に初めて成功した。IL-5Rα欠損マウスではIL-5で惹起される好酸球増多が認められず、CD5陽性B細胞の割合が有意に低いことを明らかにした。

这项研究将阐明免疫活性细胞的发育、分化和激活机制，阐明破坏它们的因素，并开发控制它们的方法，并利用病毒致癌的动物模型在个体水平上尝试抑制致癌作用。（研究方法和研究效果）（1）为了分析鼠逆转录病毒（LP-BM5 MuLV）感染引起的免疫缺陷综合征（MAIDS）的发病机制，我们培育了性连锁免疫缺陷小鼠（XID），其中MAIDS 被延迟。我们研究了骨髓移植对抑制 MAIDS 发病的效果。我们首次揭示，通过移植感染病毒的 XID 小鼠的骨髓细胞可以抑制 MAIDS 的发病。 (2)XID小鼠的布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)具有α-氨基酸突变。为了阐明 MAIDS 延迟发作与 Btk 异常之间的关系，我们生成了野生型和 XID 型 Btk 的转基因小鼠。分析结果显示，源自转基因的Btk具有活性，并且XID小鼠中缺乏的CD5阳性B细胞在转染野生型Btk的XID小鼠中部分恢复，并且脾B细胞显示出对无反应性抗 CD38 抗体和 IL-5 共刺激有显着反应。 (3)我们发现IFNγ-R基因缺陷小鼠的MAIDS发病延迟，表明IFNγ在发病机制中发挥着重要作用。 (4)使用IL-5反应细胞系，IL-5刺激诱导酪氨酸磷酸化和Btk、JAK1和JAK2激酶的激活，以及JAK激酶的底物之一STAT5的激活。我们还首次证明 IL-5Rα 的细胞内富含脯氨酸残基的区域 (Pro-Pro-X-Pro) 对于这些激活至关重要。 (5)将在IL-5Rα的染色体基因中导入新霉素抗性基因和胸苷激酶基因的载体导入胚胎干细胞(ES)，选择突变型ES细胞。利用这一点，我们首次成功地利用常规方法生产了IL-5Rα基因缺陷小鼠。我们发现 IL-5Rα 缺陷的小鼠没有表现出 IL-5 诱导的嗜酸性粒细胞增多，并且 CD5 阳性 B 细胞的比例显着较低。