免疫系担当細胞の発生・分化に関与するリンホカイン及びその受容体の解析

参与免疫系统细胞发育和分化的淋巴因子及其受体的分析

基本信息

批准号：
02262230
负责人：
高津聖志
金额：
$ 7.68万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262230/
关键词：
ILー5 ILー5受容体長期骨髄細胞培養法 B前駆細胞 ILー5受容体cDNA

项目摘要

本研究の目的は,免疫系担当細胞の発生・分化におけるILー5の役割を見きわめ,ILー5受容体遺伝子を単離することによりILー5受容体の構成を明らかとし,ILー5受容体の種々の細胞における発現を検索することにある。1.まず長期骨髄細胞培養法を用いてILー5は好酸球の増殖とCD5(Ly1)陽性B前駆細胞の維持に有効であることを見い出した。また同時にこの培養によりT88ーMとY16という2つのILー5反応性の細胞株を樹立した。共に約10,000個の低親和性受容体(解離定数:K_D約5nM)と約1,000個の高親和性受容体(K_D約20pM)を有していた。2. ^<35>S標識ILー5を用いた化学架橋実験より,低親和性受容体は分子量約60,000の分子より,高親和性受容体はさらに分子量130,000の分子が結合してヘテロダイマ-を形成することにより構築されていると予想されている。(1)本実験ではこの分子量約60,000の分子を免疫沈降させる2つの抗体H7とT21と発現ベクタ-CDM8を用いてこの分子をコ-ドするCDNA,pILー5R.8を単離した。このcDNAをCOS7細胞で発現させることにより,この遺伝子が分子量約60,000の低親和性ILー5受容体をコ-ドしていることが示された。またこの遺伝子は親株以外にCD5^+の慢性B白血病細胞株BCL_1,またIgM産生ミエロ-マMOPC104Eで発現が認められ,mRNAのサイズは5.8kbおよび5.0kbの2種類であった。(2)また我々はT88ーM細胞3×10^<11>個よりH7結合ゲルを用いて分子量約60,000の分子を精製しそのN端17個のアミノ酸配列を決定した。その配列はcDNAから予想される18番目のアミノ酸残基から17個目までのアミノ酸残基に相当しており,cDNAはH7抗体の認識する分子をコ-ドすることが確認された。3.正常マウスの腹腔B細胞のほとんどがH7抗原を持っており,その70%以上がCD5陽性であった。この他骨髄および脾臓の一部の細胞にH7抗原の発現が認められる。今後造血分化におけるILー5受容体の発現調節を検討する予定である。

本研究的目的是确定IL-5在负责免疫系统的细胞发育和分化中的作用，通过分离IL-5受体基因阐明IL-5受体的组成，并旨在寻找身体各个细胞中的表达。 1.首先，通过长期骨髓细胞培养方法，我们发现IL-5对嗜酸性粒细胞增殖和CD5（Ly1）阳性B祖细胞的维持有效。同时，使用该培养物建立了两种 IL-5 反应性细胞系 T88-M 和 Y16。两者均具有约 10,000 个低亲和力受体（解离常数：K_D 约 5 nM）和约 1,000 个高亲和力受体（K_D 约 20 pM）。 2.使用^ 35 S-标记的IL-5的化学交联实验表明，低亲和力受体结合分子量约为60,000的分子，而高亲和力受体结合分子量约为60,000的分子。 130,000形成异二聚体，预计将通过成型构建。 (1) 在本实验中，我们使用两种抗体 H7 和 T21 免疫沉淀该分子（分子量约为 60,000）和表达载体 CDM8，分离了编码该分子的 cDNA pIL-5R.8。通过在COS7细胞中表达该cDNA，表明该基因编码分子量约为60,000的低亲和力IL-5受体。除亲本株外，该基因还在CD5^+慢性B白血病细胞系BCL_1和产生IgM的骨髓瘤MOPC104E中表达，mRNA大小分别为5.8kb和5.0kb。 (2)我们还利用H7结合凝胶从3×10^11T88-M细胞中纯化了分子量约为60,000的分子，并确定了17个N端的氨基酸序列。该序列对应于从cDNA预测的第18至17位氨基酸残基，并且证实该cDNA编码被H7抗体识别的分子。 3、正常小鼠腹膜B细胞多数有H7抗原，其中70%以上为CD5阳性。此外，在骨髓和脾脏的一些细胞中观察到H7抗原表达。未来，我们计划研究造血分化过程中IL-5受体表达的调控。