細胞骨格系による中枢シナプス機能発現の分子機作に関する研究

细胞骨架系统表达中枢突触功能的分子机制研究

基本信息

批准号：
06253212
负责人：
祖父江憲治
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.神経細胞におけるアネキシンVI結合蛋白質:神経細胞の細胞膜骨格機能Ca^<2+>制御機構を明かにすることを目的として、脳に比較的豊富に存在するCa^<2+>、燐脂質結合蛋白質アネキシンVIの標的蛋白質の検索を行なった。その結果、細胞膜骨格蛋白質カルスペクチンがアネキシン結合蛋白質であることを見いだした。さらに、再構成実験からアネキシンVIがCa^<2+>、燐脂質依存性にF-アクチン-カルスペクチンの細胞膜骨格を制御し得ることを明かにした。アネキシンVIが細胞膜骨格のCa^<2+>制御因子として働いている可能性が示唆される。2.シナプス小胞蛋白質シナプトタグミンとカルモデュリンの結合:神経伝達物質放出過程において重要な役割を果たすシナプトタグミンの結合蛋白質の解析を行った。その結果、シナプトタグミンがカルモデュリンと結合することを見出した。この結合は、Ca^<2+>非依存性で高塩濃度でも阻害されないことから、通常の状態で両者か結合していると考えられる。カルモデュリンの結合部位は、シナプトタグミンのC2領域であった。しかしながら、カルモデュリンは、シナプトタグミンとシナプス前膜蛋白質シンタキシン、ニューレキシンとの結合には影響を与えなかった。3.シナプス小胞蛋白質シナプシンIとカルスペクチンとの結合:シナプス前膜には、通常とは異なった形でカルスペクチンが存在し、これにシナプシンIが結合する。この生理的意義の解明を目的として、両蛋白質の結合解析を行なった。この結合はCa^<2+>非依存性で、両者がカルモデュリン結合能を有するにもかかわらずカルモデュリンは影響を与えなっかた。また、シナプシンIのcAMP依存性及びカルモデュリン依存性の燐酸化により、両者の結合は部分的に阻害された。両燐酸化の効果は相加的であった。シナプシンIは、その頭部及び中間部でカルスペクチンと結合する。接合部位の詳細なマッピングによる合成ペプチドを用いることにより、両者の結合の生理機能の解明が期待される。

1。神经元中的膜联蛋白VI结合蛋白：为了澄清神经元的CA^<2+>细胞膜骨骼功能的机制，我们搜索了靶蛋白的Ca^<2+>，这是一种磷脂结合蛋白ANDENXIN VI，这些蛋白质在大脑中是相对丰富的。结果，发现细胞膜骨骼蛋白Callpectin是膜联蛋白结合蛋白。此外，重建实验表明，膜联蛋白VI可以以Ca^<2+>和磷脂依赖性方式调节F-肌动蛋白的细胞膜骨骼。这表明膜联蛋白VI可以充当细胞膜骨骼的CA^<2+>调节剂。 2。突触囊泡蛋白突触蛋白和钙调蛋白的结合：我们分析了突触抗体的结合蛋白，该蛋白在神经递质释放过程中起重要作用。结果，发现突触毒素结合钙调蛋白。该结合是Ca^<2+> - 独立的，并且在高盐浓度下不受抑制，被认为是正常状态的结合。钙调蛋白的结合位点是突触毒素的C2区域。然而，钙调蛋白对突触毒素与突触前膜蛋白征肽和神经毒素的结合没有影响。 3。突触囊泡蛋白突触与Carspectin的结合：突触前膜包含不同形式的汽车谱，与之结合。为了阐明这种生理意义，对两种蛋白质进行了结合分析。这种结合是Ca^<2+>独立的，尽管两者都具有钙调蛋白结合能力，但钙调蛋白也没有作用。此外，突触素I的cAMP依赖性和钙调蛋白依赖性磷酸化部分抑制了它们之间的结合。两种磷酸化的作用都是加性的。突触I在其头部和中部与汽车光谱结合。通过通过结合位点的详细映射使用合成肽，可以预期可以阐明两者之间结合的生理功能。