シナプス後肥厚部(PSD)特異的蛋白質の検索と機能解析

突触后增厚区 (PSD) 特异性蛋白的搜索和功能分析

基本信息

批准号：
12053249
负责人：
祖父江憲治
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

PSD(シナプス後肥厚部)のダイナミックにして特徴的形態を形成する物質根拠とそのメカニズムを追究するべく、PSD特異的モノクローナル抗体を用いたPSD構成蛋白質の検索とその機能解析を本研究の目的とした。1)モノクローナル抗体によるPSD構成蛋白質の検索分子量800kD〜25kDの30種類の蛋白質に対するモノクローナル抗体を用いてイムノスクリーニングにより検索を進行中で、3種類の新現蛋白質をクローニングし、4種類のPSDに局在する既知蛋白質を同定した。2)PSD-Zip45の機能解析N末側にEVH1ドメイン、C末側に特有のロイシンジッパー・モチーフを有する蛋白質をクローニングし、PSD-Zip45と名づけた。EVH1ドメインはI型代謝性グルタミン酸受容体(mGluR1およびmGluR5)と結合し、ロイシンジッパー・モチーフは強力な自己多量体形成能を示す。そこで、COS7細胞共発現系を用いて、PSD-Zip45によるmGluR1αクラスター形成を証明した。また、シナプスへのPSD-Zip45ターゲッティング機構を解明した。さらにPSD-Zip45の新たな機能を解析する目的で、yeast-two hybrid法によりPSD-Zip45結合蛋白質の検索を用い、新規2蛋白質と既知3蛋白質をクローニングした。3)PSD-Zip70の機能解析C末側にロイシンジッパー・モチーフとコイルドコイル構造を有する新規蛋白質をクローニングし、dendritic spineおよびshaftに局在することを明らかにした。

为了探索构成PSD的动态和独特形态（突触后增厚区）的材料基础和机制，本研究的目的是使用PSD特异性的单克隆抗体及其功能分析来搜索PSD-固定蛋白。 1）使用单克隆抗体搜索对PSD组成蛋白进行搜索，该搜索是通过使用单克隆抗体对30个分子量为800 kd至25 kD的30蛋白进行免疫统计搜索进行的。克隆了三种新的蛋白质，并鉴定出已知的蛋白质局部定位于四种类型的PSD。 2）对N末端上具有EVH1结构域的PSD-ZIP45的功能分析和C-terinus独特的亮氨酸拉链基序的蛋白质被克隆并命名为PSD-ZIP45。 EVH1结构域与I型代谢性谷氨酸受体（MGLUR1和MGLUR5）结合，亮氨酸拉链基序具有强大的自我培养物形成潜力。因此，我们使用COS7细胞共表达系统通过PSD-ZIP45证明了MGLUR1α簇的形成。我们还阐明了突触的PSD-ZIP45靶向机制。此外，为了分析PSD-ZIP45的新功能，我们使用酵母 - 两种混合方法对PSD-ZIP45结合蛋白进行了搜索，以克隆新的两种蛋白质和已知的三种蛋白质。 3）PSD-ZIP70的功能分析具有亮氨酸拉链基序和盘绕线圈结构的新型蛋白质在C端侧克隆，并揭示其定位于树突状的脊柱和轴。