細胞骨格系による中枢シナプス機能発現の分子機作に関する研究

细胞骨架系统表达中枢突触功能的分子机制研究

基本信息

批准号：
05260214
负责人：
祖父江憲治
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.神経系細胞の動的な細胞基質間接着構造とアクチン及びアクチン結合蛋白質神経細胞とアストロサイトにおけるアクチンフィラメント・ゲルゾリン・アクトミオシン系蛋白質(ミオシン・カルデスモン・トロポミオシン)の細胞内局在を検索した。その結果、神経成長円錐にゲルゾリンとカルデスモン・トロポミオシンがアクチンフィラメントとともに局在していることを見い出した。この所見は、成長円錐のCa依存性の活動性にゲルゾリンおよびアクトミオシン系収縮要素が関与していることを示している。また、培養アストロサイトがアクチンフィラメントを豊富に含む活発に運動する基質接着構造を形成することを明らかにした。この接着構造には、ゲルゾリンとアクトミオシン系蛋白質が集積しておりその運動性の物質的基盤となっていることが示唆された。2.神経細胞におけるアネキシンVI結合蛋白質神経細胞膜骨格のCa制御機構を明かにすることを目的として細胞膜直下に局在することが知られているCa結合蛋白質アネキシンVIの標的蛋白質の検索をラット脳の細胞骨格分画を用いて行った。その結果、アネキシンVIは、細胞膜骨格主要構成員カルスペクチンとCa及びリン脂質依存性に結合することを見いだした。この結合は、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸に特異的で、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノルアミンでは認められなかった。カルスペクチンは、F-アクチンと結合し、F-アクチン架橋作用を有することが知られている。このカルスペクチンの機能へのアネキシンVIの効果を落下球法による粘度測定及び遠心法により調べた。アネキシンVIのCa及びリン脂質依存性のカルスペクチンへの結合が、カルスペクチンのF-アクチンへの結合を阻害し、カルスペクチンのF-アクチン架橋作用を阻害することが明かとなった。このように、アネキシンVIは、細胞膜直下で細胞膜骨格の消失、再構築といった細胞膜骨格機能制御におけるCaセンサーとして働き得る可能性が示された。

1.神经系统细胞中的动态细胞-基质粘附结构以及肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白我们研究了神经细胞和星形胶质细胞中肌动蛋白丝、凝溶胶蛋白和肌动球蛋白（肌球蛋白、钙结合蛋白和原肌球蛋白）的细胞内定位。结果，我们发现凝溶胶蛋白和卡尔德斯蒙原肌球蛋白与肌动蛋白丝一起定位在神经生长锥中。这一发现表明凝溶胶蛋白和肌动球蛋白为主的收缩元件参与钙依赖性生长锥活性。我们还发现，培养的星形胶质细胞形成富含肌动蛋白丝的主动运动基质粘附结构。有人认为，凝溶胶蛋白和肌动球蛋白在这种粘附结构中积累，并作为其运动的物质基础。 2.神经细胞中的Annexin VI结合蛋白为了阐明神经细胞膜骨架的Ca控制机制，我们对Annexin VI的靶蛋白进行了搜索，这是一种已知位于细胞正下方的Ca结合蛋白大鼠大脑中的膜，这是通过细胞骨架分级完成的。结果，我们发现膜联蛋白 VI 以 Ca 和磷脂依赖性方式与细胞膜骨架的主要成员 calspectin 结合。这种结合对磷脂酰丝氨酸和磷脂酸具有特异性，而在磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺中未观察到这种结合。 Calspectin 已知可与 F-肌动蛋白结合并具有 F-肌动蛋白交联作用。通过使用落球法和离心测量粘度来研究膜联蛋白 VI 对钙高蛋白功能的影响。结果表明，膜联蛋白 VI 与 calspectin 的 Ca 和磷脂依赖性结合抑制了 calspectin 与 F-肌动蛋白的结合，并抑制了 calspectin 对 F-肌动蛋白的交联作用。因此，表明膜联蛋白VI可以作为Ca传感器来控制细胞膜骨架功能，例如直接位于细胞膜下方的细胞膜骨架的消失和重组。