癌細胞動的接着部の分子構築の解析

癌细胞动态粘附位点的分子结构分析

基本信息

批准号：
03152077
负责人：
祖父江憲治
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度我々は、ミオシン・カルデスモン・トロポミオシンなどアクトミオシン系の根幹をなす蛋白質がアクチンフィラメントとともに、癌細胞の動的接着部に著明に集積していることを見いだした。従来から動的接着部の活発な運動性については良く知られていたが、その運動性の物質的基盤についての知見は乏しかった。今回の我々の知見により、動的接着部の運動性がアクトミオシン系に由来することが明らかになった。また、正常細胞のストレスファイバ-に比べ、動的接着部のマイクロフィラメントは、構成蛋白質間の相互作用が弱くより不安定な構造体であることを明らかにした。また今年度は、細胞膜骨格蛋白質(ビンキュリン・タ-リン・αーアクチニン・カルスペクチン・アクチン・アネキシンII・アネキシンVI)に関する形態学的・生化学的検討もすすめた。ビンキュリン・αーアクチニン・タ-リン・アネキシンVIはアクチンとともに正常細胞では接着斑に、癌細胞では動的接着部の基質接着領域に局在していた。一方、カルスペクチンとアネキシンIIは、正常細胞ではストレスファイバ-の走行に関連して細胞膜内面に広く分布していたが、癌細胞においては動的接着部にリング状の特徴的な集積が観察された。次に、各蛋白質の発現量を蛋白質レベルで検討したところ、アネキシンVIが形質転換にともなって著明に減少していた。2次元電気泳動でアネキシンVIのアイソマ-の解析を行ったところ、正常細胞でみられる数個のアイソマ-のうち特定のアイソマ-の消失が観察された。また、アネキシンVIが試験管内で、アネキシンIIと同様にp60^<src>の基質となることを確認した。

今年，我们发现构成肌动蛋白系统基础的蛋白质，例如肌球蛋白，Caldesmon和Tropomyosin，在癌细胞的动态粘附下与肌动蛋白丝一起显着积累。过去，动态粘合剂的主动运动性在过去众所周知，但是对它们的运动的材料基础知之甚少。我们的发现表明，动态粘附区域的动态运动起源于肌动球蛋白系统。此外，揭示了动态粘附部分处的微丝与组成蛋白的相互作用较少，与正常细胞的应激纤维相比，结构更不稳定。今年，我们还促进了细胞膜骨骼蛋白（Vinculin，Talin，Alpha-Actinin，carspentin，actspentin，actin，Annexin II和Annexin VI）的形态学和生化研究。 Vinculin，α-肌动蛋白，TA-LIN和膜联蛋白VI定位于正常细胞的局灶性粘附，在癌细胞中，在动态粘附的底物粘附区域中。另一方面，与应激纤维的运行相关的呼叫光谱和膜联蛋白II在细胞膜内表面的正常细胞中广泛分布，但是在癌细胞中，在动态粘附时观察到了特征性环状积累。接下来，当在蛋白质水平上检查每种蛋白质的表达水平时，通过转化会显着降低膜联蛋白VI。 2D电泳对膜联蛋白VI的异构体的分析显示，在正常细胞中看到的几种异构体中特定异构体的消失。还可以证实，膜联蛋白VI是p60^<src>的底物，就像试管中的Annexin II一样。