肥満および歯周炎に共通のmiRNAを標的とした新規抗炎症治療薬の開発

开发针对肥胖和牙周炎常见 miRNA 的新型抗炎药物

• 批准号: 20K18512
• 负责人: 佐野 朋美
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18512/
• 关键词: マクロファージ; 炎症; microRNA; 肥満; 脂肪組織炎症; 慢性炎症; 歯周炎; インスリン抵抗性

炎症状態で発現抑制するmiRNAとその抗炎症効果を検討した。まず、炎症モデルとして高脂肪食を摂取させたマウスの脂肪組織を用い、microRNA発現をマイクロアレイで網羅的に解析した。炎症状態の脂肪組織で発現抑制したmicroRNAの中からmiR-582-5pに着目した。このmicroRNAはqPCRでも炎症脂肪組織で発現抑制し、また骨髄由来マクロファージやマクロファージ様細胞RAW264.7をLPS刺激した際にも有意に発現抑制したことから、少なくともマクロファージでは炎症状態で発現抑制することが分かった。よって、以下の検討ではRAW264.7細胞を用いた。細胞にmiR-582-5pを導入しLPS刺激をすると、炎症性サイトカインTnfa、IL-1b、IL-6は遺伝子レベルでもタンパク質レベルでも有意に発現抑制し、このmicroRNAの抗炎症効果が示された。次に、この抗炎症メカニズムを解明するため、ターゲット予測サイトを用いmiR-582-5pの標的遺伝子探索を行い、Skp1に着目した。ルシフェラーゼアッセイによりSkp1とこのmicroRNAが結合することを確認した。このmicroRNAの導入によりSKP1発現が有意に抑制することから、Skp1はmiR-582-5pのターゲットであると言える。SKP1は複合体を形成し、NF-kB経路においてIkBaの分解とp65のリン酸化を誘導するが、si-Skp1でSkp1をノックダウンしたときだけでなく、miR-582-5pの導入によってもSkp1発現が下がり、IkBaの分解とp65のリン酸化、さらにはそれに続くp65の核内移行が抑制した。以上をまとめると、炎症状態ではmiR-582-5pの発現抑制や炎症性サイトカインの発現亢進が起こるが、このmicroRNAを導入するとターゲットであるSkp1に結合することで抗炎症作用を示す。

我们研究了在炎症条件下表达受到抑制的 miRNA 及其抗炎作用。首先，使用高脂肪饮食小鼠的脂肪组织作为炎症模型，使用微阵列全面分析 microRNA 表达。在炎症条件下脂肪组织中表达受到抑制的 microRNA 中，我们重点关注 miR-582-5p。通过 qPCR，这种 microRNA 的表达在发炎的脂肪组织中受到抑制，并且当用 LPS 刺激骨髓源性巨噬细胞和巨噬细胞样细胞 RAW264.7 时，其表达也显着受到抑制，这表明该表达在炎症条件下受到抑制。至少在巨噬细胞中是这样。因此，本研究选用RAW264.7细胞。当细胞被引入 miR-582-5p 并用 LPS 刺激时，炎症细胞因子 Tnfa、IL-1b 和 IL-6 的表达在基因和蛋白质水平上均受到显着抑制，证明了该 microRNA 的抗炎作用.接下来，为了阐明这种抗炎机制，我们使用预测的靶位点搜索miR-582-5p的靶基因，并重点关注Skp1。我们通过荧光素酶测定证实了 Skp1 和该 microRNA 结合。由于通过导入该microRNA显着抑制了SKP1的表达，因此可以说Skp1是miR-582-5p的靶标。 SKP1 形成复合物并诱导 NF-kB 通路中的 IkBa 降解和 p65 磷酸化，但不仅当用 si-Skp1 敲除 Skp1 时，而且当引入 miR-582-5p 时，表达也会降低，从而抑制 IkBa 降解和磷酸化。 p65 磷酸化，以及随后的 p65 核转位。综上所述，在炎症条件下，miR-582-5p的表达受到抑制，炎症细胞因子的表达增加，但当引入这种microRNA时，它通过与其靶标Skp1结合而表现出抗炎作用。

项目成果

Adipose-specific C-C motif chemokine ligand (CCL) 19 overexpression drives the mice to both insulin resistance and weight gain

脂肪特异性 C-C 基序趋化因子配体 (CCL) 19 过度表达会导致小鼠出现胰岛素抵抗和体重增加

• DOI: 10.1136/bmjdrc-2020-001871
• 发表时间: 2021
• 作者: Hayashi Masato;Iwashita Misaki;Nishimura Yuki;Shinjo Takanori;Sano Tomomi;Yamashita Akiko;Fukuda Takao;Sanui Terukazu;Asano Tomoichiro;Nishimura Fusanori
• 通讯作者: Nishimura Fusanori

Anti-inflammatory Effects of miRNA-146a Induced in Adipose and Periodontal Tissues

miRNA-146a 在脂肪和牙周组织中诱导的抗炎作用

• DOI: 10.1016/j.bbrep.2020.100757
• 发表时间: 2020
• 作者: Taiki Sanada; Tomomi Sano; Yusuke Sotomaru; Rehab Alshargabi; Yosuke Yamawaki; Akiko Yamashita; Hiroaki Matsunaga; Misaki Iwashita; Takanori Shinjo; Takashi Kanematsu; Tomoichiro Asano; Fusanori Nishimura
• 通讯作者: Fusanori Nishimura

miR-582-5p targets Skp1 and regulates NF-κB signaling-mediated inflammation

miR-582-5p 靶向 Skp1 并调节 NF-κB 信号介导的炎症

• DOI: 10.1016/j.abb.2022.109501
• 发表时间: 2023
• 影响因子: 3.9
• 作者: Li Rongzhi;Sano Tomomi;Mizokami Akiko;Fukuda Takao;Shinjo Takanori;Iwashita Misaki;Yamashita Akiko;Sanui Terukazu;Nakatsu Yusuke;Sotomaru Yusuke;Asano Tomoichiro;Kanematsu Takashi;Nishimura Fusanori
• 通讯作者: Nishimura Fusanori

RANKL elevation activates the NIK/NF-κB pathway, inducing obesity in ovariectomized mice.

RANKL 升高会激活 NIK/NF-κB 通路，导致卵巢切除小鼠肥胖。

• DOI: 10.1530/joe-21-0424
• 发表时间: 2022
• 作者: Mori M; Mizokami A; Sano T; Mukai S; Hiura F; Ayukawa A; Koyano K; Kanematsu T; Jimi E
• 通讯作者: Jimi E

XAF1 overexpression exacerbates diabetes by promoting pancreatic β-cell apoptosis.

XAF1 过度表达通过促进胰腺 β 细胞凋亡而加剧糖尿病。

• DOI: 10.1007/s00592-022-01930-y
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 3.8
• 作者: Nishimura Y; Iwashita M; Hayashi M; Shinjo T; Watanabe Y; Zeze T; Yamashita A; Fukuda T; Sanui T; Sano T; Asano T; Nishimura F.
• 通讯作者: Nishimura F.