HMGタンパク質のDNA結合ドメイン構造と認識機構の解析

HMG蛋白DNA结合域结构及识别机制分析

基本信息

批准号：
09249217
负责人：
吉田充輝
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1,HMG1のDNA結合ドメインのDNA認識機構の解析HMG1タンパク質のDNA結合に主役的に働くBox Bの中で、DNAへのインターカレーションが予測される101F、102Fの結合における重要性を実験的に明らかにした。さらに分子動力学シミュレーションにより、これらの側鎖の配位と結合との関連を解析した。その結果、Box BのDNAへの結合が102F側鎖のDNAへのインターカレーションにより高められること、この側鎖の方向性を101Fが規定していることが明らかとなった。2,HMG1、2がもつDNAインテグレーションの促進機能の発見研究の過程で、HMG1、HMG2が外来遺伝子の宿主ゲノムDNAへの組込み(インテグレーション)を促進する活性を有することを初めて見い出し、促進反応について詳細な検索を行った。HMG1、2を発現するネオマイシン耐性遺伝子を持つプラスミドをHeLa細胞に導入し、G418で選択した。G418耐性コロニー数を計測したところ、コントロールプラスミドを導入の場合と比較して約10倍に増加していた。G418耐性細胞内にインテグレートされたプラスミドのコピー数も約2倍に増加していた。さらに、HMG1、2mRNAに対するアンチセンスRNAをHeLa細胞で発現させるとコロニー数は約1/2に減少した。以上の結果より、HMG1、2が外来遺伝子の宿主ゲノムへのインテグレーションの促進反応に直接関与していることが明らかになった。3,HMGタンパク質によるDNA依存性プロテインキナーゼ活性促進機構を詳細に解析した。

1. HMG1 DNA 结合结构域的 DNA 识别机制分析通过实验研究了 Box B 中预测插入 DNA 的 101F 和 102F 的重要性，揭示了其在 HMG1 蛋白的 DNA 结合中起主要作用。。此外，我们利用分子动力学模拟分析了这些侧链的配位和键合之间的关系。结果表明，Box B 与 DNA 的结合通过将 102F 侧链插入 DNA 得到增强，并且 101F 调节该侧链的方向性。 2.HMG1和2促进DNA整合功能的发现在我们的研究过程中，我们首次发现HMG1和HMG2具有促进外源基因整合到宿主基因组DNA中的活性，并得到了详细的促销反应我做了搜索。将含有表达 HMG1 和 2 的新霉素抗性基因的质粒引入 HeLa 细胞并用 G418 选择。当测量G418抗性集落的数量时，发现与引入对照质粒时相比，增加了约10倍。整合到 G418 抗性细胞中的质粒拷贝数也增加了大约两倍。此外，当针对HMG1和2 mRNA的反义RNA在HeLa细胞中表达时，集落的数量减少到大约一半。上述结果表明HMG1和HMG2直接参与促进外源基因整合到宿主基因组中。 3.详细分析了HMG蛋白促进DNA依赖性蛋白激酶活性的机制。