血小板に存在するアラキドン酸高親和性ホスホリパーゼA_2の生化学的解析

血小板中花生四烯酸高亲和力磷脂酶 A_2 的生化分析

基本信息

批准号：
04680154
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680154/
关键词：
血小板ホスホリパーゼA_2 リゾホスホリパーゼ臨界シセル濃度

项目摘要

刺激にともなった細胞のアラキドン酸代謝物産生反応過程の律速と予想されるホスホリパーゼA_2(PLA_2)を、ウサギ血小板細胞質から精製した。本酵素の分子量は約88,000であり、10^<-6>M以下のCa^<2十>濃度で充分に活性を発現し、アラキドン酸含有リン脂質をリノール酸含有リン脂質よりよい基質とした。本研究では本PLA_2がリゾホスホリパーゼ活性を合わせ持つことを見いだし、以下の通り解析した。(1)本酵素のリゾホスホリパーゼ活性は、基質であるリゾホスファチジルコリン(リゾPC)の濃度が臨界ミセル濃度以上の時に観察された。従来より報告のあるリゾホスホリパーゼはいずれも単分子状態のリゾリン脂質も基質とし、特徴的であった。一方、本酵素の基質とはならないジアルキルPCからなる脂質二重層の中にリゾPCを平衡化させて反応させたところ、基質濃度がcmc以下でもリゾホスホリパーゼ活性は充分観察された。本酵素は脂質分子集合体中のリゾPCを基質とすると考えた。(2)本酵素のリゾホスホリパーゼ活性は特徴的な脂肪酸選択性を示した。即ち、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸からなるリゾPCをミセル状態で存在させた場合、切り出される脂肪酸はステアリン酸を1としたときパルミチン酸8、オレイン酸23であった。基質をジアルキルPCの脂質二重層中に平衡化させたと考えられる場合にも同様の脂肪酸選択性が観察された。本酵素は、リゾPCの脂肪酸鎖そのものを識別していると考えられた。(3)本酵素のPLA_2活性が10^<-7>Mから10^<-6>MのCa^<2十>濃度で活性化されるのに対し、リゾホスホリパーゼ活性はCa^<2十>非要求性であった。両活性に対する化学修飾剤または中和抗体の反応性の差から判断して、リゾホスホリパーゼ活性の活性中心はPLA_2活性の活性中心と異なる部位に存在すると予想している。両活性が生理的状態でどの様に制御され、発現しているのかを検討していくことが今後の課題である。

磷脂酶 A_2 (PLA_2) 预计在细胞内刺激诱导的花生四烯酸代谢物产生反应过程中起限速作用，从兔血小板细胞质中纯化。该酶的分子量约为88,000，并且在低于10 ^ -6 M的Ca 20 浓度下完全有活性，使得含花生四烯酸的磷脂成为比含亚油酸的磷脂更好的底物。本研究中，我们发现该PLA_2也具有溶血磷脂酶活性，并对其进行了如下分析。 (1)当底物溶血磷脂酰胆碱(lysoPC)的浓度高于临界胶束浓度时，观察到该酶的溶血磷脂酶活性。迄今为止报道的所有溶血磷脂酶都是独特的，因为它们也使用单分子状态的溶血磷脂作为底物。另一方面，当溶血-PC在由二烷基PC组成的脂质双层中平衡并反应时，二烷基PC不是该酶的底物，即使当底物浓度低于cmc时，也观察到足够的溶血磷脂酶活性。人们认为这种酶使用脂质分子聚集体中的溶血PC作为底物。 (2)该酶的溶血磷脂酶活性表现出特有的脂肪酸选择性。即，当由硬脂酸、棕榈酸和油酸组成的lyso-PC以胶束状态存在时，当硬脂酸为1时，切出的脂肪酸为8个棕榈酸和23个油酸。当认为底物在二烷基PC的脂质双层中平衡时，观察到类似的脂肪酸选择性。这种酶被认为能够识别 lyso-PC 的脂肪酸链本身。 (3)该酶的PLA_2活性在Ca^20浓度为10^-7M至10^-6M时被激活，而溶血磷脂酶活性在Ca^20浓度为10时被激活。 ^<-7>M 到 10^<-6>M >这不是必需的。从化学修饰剂或中和抗体对两种活性的反应性差异来看，我们预测溶血磷脂酶活性的活性中心存在于与PLA_2活性不同的位点。未来的挑战是研究这两种活动在生理条件下是如何调节和表达的。