ヒ素含有グリセロリン脂質の解析に基づいたヒ素の毒性発現メカニズムの衛生薬学的研究

基于含砷甘油磷脂分析的砷毒性机制的卫生学和药学研究

基本信息

批准号：
10877376
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、哺乳動物細胞のアルセノコリン(AsC)存在下における、ホスホリパーゼD(PLD)の反応によるホスファチジルアルセノコリン(PAsC)産生の可能性について検討した。また、PAsCの細胞増殖に与える影響について検討を行った。1:ヒト単核球系白血病細胞株U937細胞をホルボールエステル(PMA)で刺激すると、プロテインキナーゼCを介してPLDが活性化されることが既に報告されている。そこで、あらかじめ放射標識オレイン酸で細胞膜を標識したU937細胞をPMAで1時間刺激した。まず、PAsCと他の主要なリン脂質が区別できる2次元TLCの系を検討し、開発した。この系を用いて、刺激後の細胞から脂質を抽出した後、生成したPAsC量を測定した。その結果、PMAで刺激した細胞は未刺激細胞に比べ、有意にPAsC生成量が増加した。このことから、U937細胞をAsC存在下で1時間PMAにより刺激すると、PLDを介した経路でPAsCが生成される可能性が示唆された。2:U937細胞をPAsCの産生が検出できた上で示した条件に基づきPMAで刺激した後、AsCを洗浄して除きさらに培養を24時間続けた。24時間後の細胞数を数え、PAsCの細胞増殖に与える影響を検討した結果、コリン存在下でPMAにより刺激を行いPCを産生させた場合と比べ、細胞増殖の促進傾向が観察された。この傾向は未処理細胞では観察されなかった。以上の結果より、高等動物細胞において細胞内でPAsCが産生され、さらに生成されたPAsCが細胞増殖に何らかの影響を与える可能性が示唆された。

今年，我们研究了在哺乳动物细胞中，在砷胆碱 (AsC) 存在的情况下，通过磷脂酶 D (PLD) 的反应生产磷脂酰砷胆碱 (PAsC) 的可能性。我们还研究了 PAsC 对细胞增殖的影响。 1：据报道，当用佛波酯（PMA）刺激人单核白血病细胞系 U937 细胞时，PLD 通过蛋白激酶 C 被激活。因此，用PMA刺激细胞膜预先用放射性标记油酸标记的U937细胞1小时。首先，我们研究并开发了一种二维薄层色谱系统，可以将 PAsC 与其他主要磷脂区分开来。使用该系统，在刺激后从细胞中提取脂质，然后测量产生的 PAsC 的量。结果，与未刺激的细胞相比，用 PMA 刺激的细胞产生的 PAsC 量显着增加。这表明当 U937 细胞在 AsC 存在的情况下用 PMA 刺激 1 小时时，PAsC 可能通过 PLD 介导的途径产生。图2：在上述可检测到PAsC产生的条件下用PMA刺激U937细胞后，洗掉AsC并继续培养另外24小时。 24小时后计数细胞数，考察PAsC对细胞增殖的影响，结果与在胆碱存在下用PMA刺激产生PC时相比，观察到促进细胞增殖的倾向。在未经处理的细胞中没有观察到这种趋势。上述结果表明，PAsC在高等动物细胞中是在细胞内产生的，并且产生的PAsC可能对细胞增殖有一定的影响。