新しい視点に立った内分泌攪乱物質の毒性発現メカニズムの解析

新视角解析内分泌干扰物毒性机制

基本信息

批准号：
16659035
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

当教室ではこれまでに、分泌型ホスホリパーゼA2(sPLA2)のうち、いくつかの分子種が齧歯類の雄性生殖器に高発現していることを見いだし、精子における発現様式を免疫染色解析した。その結果、IID-sPLA2は体部、IIF-PLA2は尾部、V-sPLA2とX-sPLA2は頭部に主に発現していることを明らかにした。それぞれのsPLA2分子種が精子内の異なる部位に局在することは、それぞれの酵素が異なった局面で機能することを意味していると考えられる。本年度の研究により、IIF-sPLA2は精巣のLeydig細胞に高発現しており、培養Leydig細胞を用いた解析で、絨毛性性腺刺激ホルモンで刺激するとIIF-sPLA2の有意な発現上昇が観察された。さらにIIF-sPLA2は糖鎖修飾や多量体形成などの翻訳後修飾を受けることを明らかにした。プロスタグランジン(PG)E2生合成経路の最終段階を触媒する酵素である細胞質型PGE合成酵素(cPGES)を同定し、シクロオキシゲナーゼ(COX)-1と機能連関して即時的PGE2産生に関与することを明らかにしてきた。一方、cPGESはコシャペロンタンパク質であるp23と同一分子である側面も有しており、本年度の研究では、cPGESの生体内機能を解明するためにcPGES-/-マウスの樹立を行った。その結果、cPGES+/-マウスは正常に発育し生殖能力にも異常は見られなかった。しかし、cPGES+/-同士を交配した結果、cPGES+/+とcPGES+/-はほぼ1:2の比率でメンデル律に従って生まれたが、cPGES-/-はcPGES+/+に対して0.15と顕著に少なく、得られたcPGES-/-新生児も生後まもなく死亡した。従って、cPGES-/-マウスは胎生致死あるいは生直後に死に至ることが明らかになった。この表現型はこれまで知られている他のアラキドン酸代謝酵素やPGE2受容体のノックアウトマウスより重篤であることから、cPGESがマウスの正常な発生や生存に必須であり、PGE2産生系のみならず分子シャペロン系にも寄与する可能性を示唆している。

在这个教室中，我们发现一些分泌的磷脂酶A2（SPLA2）在啮齿动物的雄性生殖器官中高度表达，并分析了精子中的表达方式。结果，IID-SPLA2已显示出IID-SPLA2主要在头部表达，IIF-PLA2被扣紧，并且V-SPLA2和X-SPLA2主要在头部表达。每个SPLA2物种都位于精子内的不同区域，意味着每个酶在不同阶段起作用。今年的研究揭示了睾丸的leydig细胞中的IIF-SPLA2，并且通过刺激合唱腺刺激激素来观察到使用Lewydig细胞的分析。此外，IIF-SPLA2表明，它将在翻译后进行，例如糖链修饰和多种身体形成。前列腺素（PG）E2细胞含量PGE合成酶（CPGES）是一种催化活体合成途径的酶，确定与环氧合酶（Cox）的立即生产有关。另一方面，CPGES也具有与p23，P23相同的方面，即p23，即coscaselon蛋白。结果，CPGES +/-小鼠正常发展，并且在生殖能力中未见异常。但是，由于CPGES +/-彼此之间的交叉+/-，CPGES+/+和CPGES +/-是根据Mendel Ritsu诞生的，几乎是1：2，但CPGES - / - 在CPGES+/+时在0.15时极低。。因此，发现CPGES - / - 小鼠死于胎儿致死或生命后立即死亡。由于这种表达类型比其他已知的花生四烯酸代谢和PGE2受体基因敲除小鼠更为严重，因此CPGES对于正常小鼠至关重要，如果仅产生PGE2。