高等動物細胞II型ホスホリパ-ゼA_2活性制御

高等动物细胞中 II 型磷脂酶 A_2 活性的调节

基本信息

批准号：
03680163
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03680163/
关键词：
ホスホリパ-ゼA_2 速度論的解析肝障害肥満細胞

项目摘要

哺乳動物14kDaグル-プII型ホスホリパ-ゼA2は、炎症部位侵出液、血小板や肥満細胞の刺激上清から精製されてきた。また、障害を受けた臓器中で活性化していることをみつけた。本研究では14kDaII型酵素の活性制御について以下の解析を行った。1)14kDaII型酵素の活性機構:精製ラットII型酵素が放射標識した大腸菌由来のホスファチジルエタノ-ルアミンを加水分解する反応に、基質アナログであるテトラデシルホスホコリンを添加したところ、添加量依存的に酵素活性が上昇した。アナログ添加の反応のカルシウム依存性は無添加に比べて低かった。膵臓由来の消化酵素である哺乳動物14kDaI型ホスホリパ-ゼA2を用いた解析では、同様な反応は観察されなかった。2)障害臓器のII型酵素促進脂質:ラットの四塩化炭素誘導障害肝臓でII型ホスホリパ-ゼA2が活性化することを見いだしている。障害肝臓から脂質画分を抽出したところ、基質アナログの場合と同様なII型酵素の活性化が観察された。臓器障害にともなう脂質過酸化反応により、II型酵素活性化脂質が生産されたと予想している。3)活性化肥満細胞のII型酵素促進脂質:抗原抗体複合体で刺激された肥満細胞はII型ホスホリパ-ゼA2を細胞外に放出した。また、II型酵素を特異的に阻害することを既に明らかにしている阻害剤(特異抗体、リコンビナント補体分解物、微生物由来低分子物質)が、肥満細胞の脱顆粒反応を阻害した。活性化肥満細胞から抽出した脂質画分には、上記のアッセイ条件下でII型酵素活性を促進する活性が見いだされた。未刺激肥満細胞の脂質画分には見られなかった。活性化のごく初期段階に細胞外に少量放出されたII型酵素がこの酵素促進脂質によって活性化されることが、引続き起こる脱顆粒反応過程の進行に必須であると予想している。

哺乳动物14KDA GURU-PU II型磷果-ZA A2已从炎症部件侵袭，血小板和肥大细胞的刺激中纯化。他还发现它是在残疾器官中激活的。在这项研究中，对14KDAII酶的活性控制进行了以下分析。 1）14KDAII型酶的主动机制：将纯化的大鼠II型酶添加到源自大肠杆菌标记的Caebebacteric的水解磷脂酰乙醇素的反应中，并且额外的额外添加酶活性的额外含量具有重生。钙对模拟额外反应的依赖性低于无添加剂。使用源自胰腺的消化酶（一种消化酶）使用哺乳动物14KDAI型磷酸蛋白酶型的分析并未观察到相同的反应。 2）疾病器官的II型酶促进脂质：大鼠发现II型磷酸盐-A2在肝脏中肝氯化碳诱导肝脏中被激活。当从残疾肝脏的肝脏中提取脂质馏分时，观察到II-型酶的激活如底物类似物的情况下。预计与器官疾病相关的脂质氧化物反应产生了II酶激活的脂质。 3）促进活化肥料的全细胞脂质的II型酶：抗原抗体复合物刺激的OBBEL细胞释放了细胞外II型磷脂-ZA A2。此外，抑制剂（特殊的抗体，重新配置，微生物衍生的低分子物质），已经阐明了II型酶通常抑制了II型酶，抑制了MAST细胞的反应。在从活化的肥料细胞中提取的脂质馏分中，发现在上述测定条件下促进II酶活性。在非乳脂化肥细胞的脂质分数中找不到。可以预期，在激活的早期阶段，已释放成少量酶的脂质的II型酶的激活对于持续脱粒反应过程的进展至关重要。