血管壁細胞ホスホリパ-ゼA_2の多様性と調節機構の解析

血管壁细胞磷脂酶A_2多样性及调控机制分析

基本信息

批准号：
03268209
负责人：
工藤一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

血管壁細胞のうち血管内皮細胞に注目し、そのホスホリパ-ゼA_2の性状と活性調節機構、及び生理現象への関わりを明らかにすることを目的とした。1)ヒト培養血管内皮細胞(HUVEC)のホスホリパ-ゼA_2活性の検出とその同定:HUVECライゼ-トを酵素源としてホスホリパ-ゼA_2活性を測定したところ、比較的弱いながらアラキドン酸含有リン脂質を選択的に加水分解する酵素活性が検出された。本酵素活性は、抗ウサギ血小板85‐kDa細胞質ホスホリパ-ゼA_2特異抗体により効率よく吸収された。しかし、抗14‐kDaグル-プII型ホスホリパ-ゼA_2特異抗体とは全く反応しなかった。2)細胞外グル-プII型ホスホリパ-ゼA_2のHUVECのPGI_2産生への効果:血液凝固時あるいは全身性炎症時いずれの場合も、血管内皮細胞は高濃度のII型ホスホリパ-ゼA_2に晒されて、細胞のアラキドン酸代謝への影響を受けることが予想された。そこで、HUVECについて、(1)未刺激の細胞、(2)トロンビン処理した細胞、(3)TNF処理した細胞をそれぞれ用いて、細胞外II型ホスホリパ-ゼA_2のPGI_2産生への効果を検討した。その結果、(1)酵素単独で処理した細胞は、酵素を添加していない細胞の約2倍のPGI_2を産生し、(2)トロンビン(2U/ml)存在下、細胞を10分間酵素処理したところ、相加的なPGI_2産生の亢進が観察された。更に、(3)ヒトリコンビナントTNFα(1,000U/ml)存在下酵素処理したところ、TNF単独あるいは酵素単独で添加した細胞と比べて著しく高い、相乗的なPGI_2産生が観察された。以上より、ヒト血管内皮細胞でPGI_2産生に供されるアラキドン酸は、85‐kDa細胞質ホスホリパ-ゼA_2と細胞外II型ホスホリパ-ゼA_2によって産生されると予想された。後者は、他の刺激物質と協調して、血管内皮細胞のアラキドン酸代謝を調節しているものと考えられた。

我们以血管壁细胞中的血管内皮细胞为研究对象，旨在阐明磷脂酶A_2的性质、活性调节机制及其参与的生理现象。 1）培养的人血管内皮细胞（HUVEC）中磷脂酶A_2活性的检测和鉴定：当使用HUVEC裂解物作为酶源测量磷脂酶A_2活性时，发现检测到了含花生四烯酸的磷脂，尽管选择性相对较弱。检测水解酶活性。该酶活性被抗兔血小板 85-kDa 细胞质磷脂酶 A_2 特异性抗体有效吸收。然而，它与抗14-kDa II组磷脂酶A_2特异性抗体完全不反应。 2)细胞外II型磷脂酶A_2对HUVEC产生PGI_2的影响：在血液凝固和全身炎症期间，血管内皮细胞暴露于高浓度的II型磷脂酶A_2，预计这会影响细胞花生四烯酸代谢。因此，对于 HUVEC，我们使用 (1) 未刺激的细胞、(2) 凝血酶处理的细胞和 (3) TNF 处理的细胞研究了细胞外 II 型磷脂酶 A_2 对 PGI_2 产生的影响。结果表明，(1) 仅用酶处理的细胞产生的 PGI_2 大约是未添加酶的细胞的两倍，(2) 在凝血酶 (2 U/ml) 存在的情况下用酶处理细胞 10 分钟，但附加增强观察到 PGI_2 的产生。此外，(3) 当在人重组 TNFα (1,000 U/ml) 存在下用酶处理细胞时，与单独用 TNF 或单独用酶处理的细胞相比，观察到显着更高的协同 PGI_2 产量。由上可知，人血管内皮细胞中用于产生PGI_2的花生四烯酸是由85kDa的细胞质磷脂酶A_2和细胞外II型磷脂酶A_2产生的。后者被认为与其他兴奋剂配合调节血管内皮细胞中的花生四烯酸代谢。