転写因子UNC-86の下流遺伝子群の単離と機能解析

转录因子UNC-86下游基因的分离及功能分析

基本信息

批准号：
07680856
负责人：
三谷昌平
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680856/
关键词：
ニューロン細胞種分化決定転写制御因子 C.elegans ゲノム

项目摘要

脳などの神経組織でニューロンが多様な分化を行なうメカニズムにおいて、神経系分化制御を担う転写因子のネットワークが重要な役割を果たしていると思われる.本研究の目的は、神経系の分化の記載が充実している線虫C.elegansをモデル生物とし、代表的な神経分化制御を行っている転写因子UNC-86蛋白質が転写制御している下流遺伝子群を単離し、神経系の分化と機能発現における役割を明らかにすることである.標的遺伝子候補の単離の方法としては、KinzlerとVogelsteinによるWhole Genome PCR法を用いた.現在までに、塩基配列決定により、115個の独立したクローンDNA断片が同定されている.これまでにこれらの塩基配列を用いてGenBankに登録されたC.elegansゲノムシークエンスの検索を行い、10種のユニークな部位を同定した.推定されるコード領域と比較し、得られたDNA断片が遺伝子発現制御領域である可能性のあるものが7種あった.このうちの2種について5'隣接領域とペプチドコード領域の一部を含むDNA断片をPCRによりクローン化し、lacZ融合遺伝子を作成した後、C.elegansトランスジェニック動物での発現パターンを観察した.1つはサブセットの核に発現していると思われ、ニューロンの前駆細胞の可能性を考えている.もう一方は発現を証明することができなかった.これは、用いた5'隣接領域のDNAが発現のために充分な情報を持っていなかったことが想像される.今後、これらの候補遺伝子に関して、より大きなDNA断片を用いて発現解析を行う予定である.また、標的遺伝子であることが確認されたものについては変異体の分離と表現型の解析によりその遺伝子機能を推定する.

看来，转录因子网络负责控制神经组织的神经元分化机制（例如大脑）的神经元分化机制，从而起着重要作用。这项研究的目的是使用神经蠕虫秀丽隐杆线虫，该秀丽隐杆线虫对神经系统的分化（作为模型生物体）进行了全面描述，以分离下游基因，其中转录因子UNC-86蛋白控制典型的神经分化，并阐明其在神经系统差异和功能表达中的作用。分离候选靶基因的方法是Kinzler和Vogelstein的整个基因组。使用了PCR方法。迄今为止，通过碱基测序已经确定了115个独立克隆的DNA片段。迄今为止，这些核苷酸序列被用于搜索在Genbank注册的秀丽隐杆线虫基因组序列，并确定了10个独特的位点。与推导的编码区相比，有七种类型的DNA片段可以是基因表达控制区域。对于其中两个，将包含5'侧翼区域的一部分和肽编码区域的DNA片段通过PCR克隆，并创建了LACZ融合基因。我们观察到秀丽隐杆线虫转基因动物的表达模式。一个似乎在核的子集中表达，并认为神经元祖细胞的可能性。另一个无法证明表达。可以想象，使用的5'侧翼区域中的DNA没有足够的信息来表达。将来，将使用这些候选基因的较大DNA片段进行表达分析。此外，对于确认为靶基因的人，我们将通过分离突变体和表型分析来估计基因的功能。