転写因子UNC-86の下流遺伝子群の単離と機能解析

转录因子UNC-86下游基因的分离及功能分析

基本信息

批准号：
07680856
负责人：
三谷昌平
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680856/
关键词：
ニューロン細胞種分化決定転写制御因子 C.elegans ゲノム

项目摘要

脳などの神経組織でニューロンが多様な分化を行なうメカニズムにおいて、神経系分化制御を担う転写因子のネットワークが重要な役割を果たしていると思われる.本研究の目的は、神経系の分化の記載が充実している線虫C.elegansをモデル生物とし、代表的な神経分化制御を行っている転写因子UNC-86蛋白質が転写制御している下流遺伝子群を単離し、神経系の分化と機能発現における役割を明らかにすることである.標的遺伝子候補の単離の方法としては、KinzlerとVogelsteinによるWhole Genome PCR法を用いた.現在までに、塩基配列決定により、115個の独立したクローンDNA断片が同定されている.これまでにこれらの塩基配列を用いてGenBankに登録されたC.elegansゲノムシークエンスの検索を行い、10種のユニークな部位を同定した.推定されるコード領域と比較し、得られたDNA断片が遺伝子発現制御領域である可能性のあるものが7種あった.このうちの2種について5'隣接領域とペプチドコード領域の一部を含むDNA断片をPCRによりクローン化し、lacZ融合遺伝子を作成した後、C.elegansトランスジェニック動物での発現パターンを観察した.1つはサブセットの核に発現していると思われ、ニューロンの前駆細胞の可能性を考えている.もう一方は発現を証明することができなかった.これは、用いた5'隣接領域のDNAが発現のために充分な情報を持っていなかったことが想像される.今後、これらの候補遺伝子に関して、より大きなDNA断片を用いて発現解析を行う予定である.また、標的遺伝子であることが確認されたものについては変異体の分離と表現型の解析によりその遺伝子機能を推定する.

控制神经系统分化的转录因子网络似乎在神经组织（例如大脑）中神经元以各种方式分化的机制中发挥着重要作用。使用丰富的线虫线虫作为模型生物，该项目的目的是分离受控制神经分化的转录因子UNC-86转录调控的下游基因，并阐明它们在神经系统分化和功能表达中的作用。基因组采用PCR方法。迄今为止，已通过核苷酸测序鉴定出115个独立的克隆DNA片段。迄今为止，这些核苷酸序列已用于鉴定在GenBank中登记的线虫基因组序列，并鉴定出10个独特位点。通过将DNA片段与预测的编码区进行比较，有七种类型的DNA片段可能是基因表达控制区。对于其中的两种，在克隆DNA后将5'侧翼区和肽编码区分开。通过PCR得到含有lacZ融合基因的片段，我们观察到秀丽隐杆线虫转基因动物中的表达模式；一种似乎在一个亚群的细胞核中表达，这表明神经元祖细胞的可能性，而另一种则表明无法证明表达，这是因为使用了 5' 侧翼 DNA。不适合表达。可以假设他们没有关于这些候选基因的足够信息。将来，我们计划使用更大的DNA片段对这些候选基因进行表达分析。我们还计划使用更大的DNA片段来分析这些候选基因的表达我们通过分离突变体并分析它们的表型来估计基因功能。