RNAiによる遺伝子ノックダウンと抗原デリバリーを組み合せた新規免疫療法の確立

建立一种新的免疫疗法，结合基因敲除和使用 RNAi 的抗原递送

基本信息

批准号：
17659045
负责人：
高倉喜信
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

RNA干渉(RNA interference:RNAi)は効率よく特定遺伝子の"ノックダウン"が可能な手法であり、既に有用な遺伝子機能解析ツールとして広範な基礎研究の領域で汎用されている。一方、RNAiの治療への応用も強く期待されており、培養細胞を用いたin vitroの系を中心に研究が展開されている。本研究では、最も強力な抗原提示細胞である樹状細胞を標的に取り上げ、この細胞に発現している補助刺激分子をRNAiによりノックダウンさせると同時に樹状細胞へのターゲティング能を賦与した抗原タンパクをデリバリーすることを試みた。これにより、十分な補助刺激シグナルがない状態でT細胞への抗原提示が起こる人工的"アネルギー"を作製することにより抗原特異的な免疫寛容の誘導を試み、新たな免疫療法としての可能性を検討する。補助刺激分子CD80およびCD86を標的分子として選択し、mRNAの配列を考慮したshRNA(short hairpin RNA)発現プラスミドベクターを構築した。これらをマウス樹状細胞株DC2.4細胞にトランスフェクションし、卵白アルブミン反応性のT細胞ハイブリドーマを用いてIL-2産生を指標にT細胞活性化能を評価した。その結果、コントロールベクターをトランスフェクションした細胞に比較し、shRNA発現ベクターを導入した細胞ではIL-2産生の減少が見られ、補助刺激分子ノックダウンによりT細胞活性化能を減弱できる可能性が示された。しかしながら、抗原提示細胞においてはshRNA発現ベクターの導入効率が低く、その改善が重要課題であることも明らかとなった。

RNA干扰（RNAi）是一种特定基因的敲除敲击的有效方法，并且已经在广泛的基础研究领域中是普通的，它是一种有用的遗传功能分析工具。另一方面，RNAi治疗的应用也很强，研究主要是在使用培养细胞的体外系统上进行的。在这项研究中，靶向树突状细胞（最强大的抗原表现细胞）的抗原蛋白会击倒这些细胞中表达的辅助刺激分子，并给出了树突状细胞的靶向能力。结果，我们将通过产生人工“肛门”来诱导抗原特异性免疫耐受性，该“肛门”为T细胞提供抗原表现，而没有足够的补贴刺激信号，并且可以考虑新的免疫疗法。选择辅助刺激分子和CD86作为靶分子，并考虑了已建立mRNA阵列的shRNA（短发夹RNA）表达质粒载体。将它们转移到小鼠样细胞量DC2.4细胞中，并使用IL-2产生作为使用蛋白蛋白反应性T细胞杂交瘤来评估T细胞活化能力。结果，将对照矢量与转染细胞进行比较，引入SHRNA表达载体的细胞的IL-2产生降低，这可能会通过协助刺激分子分子敲低来降低T细胞活化能力。但是，在抗原呈递细胞中，SHRNA表达载体的引入效率很低，而改善是一个重要的问题。