一回の投与で繰り返しタンパク質を供給可能なオンデマンド型遺伝子治療システムの開発

开发可通过单次给药重复提供蛋白质的按需基因治疗系统

• 批准号: 22659009
• 负责人: 高倉 喜信
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22659009/
• 关键词: 遺伝子発現; 肝臓; 転写因子; 非ウィルスベクター; 物理刺激

治療タンパク質を"必要に応じて繰り返し"発現させる「オンデマンド型遺伝子治療システム」の実現を目的に、遺伝子発現再活性化のためのシグナルの探索を行った。大容量の等張溶液を急速に静脈内投与するハイドロダイナミクス法(HD法)により一過性発現型plasmid DNA (pDNA)を用いて遺伝子導入したのち、等張溶液をHD法に準じて投与することで、低下した発現が再上昇する遺伝子発現再活性化現象がみられること、この再活性化現象には転写因子AP-1やNF-κBの活性化が関与することを既に報告している。これらの転写因子を活性化する代表的な要因として炎症性サイトカインと活性酸素が挙げられることから、再活性化に及ぼす炎症性サイトカイン及び活性酸素の影響について検討した。HD法によって炎症性サイトカインであるインターロイキン6(IL6)が産生されることを見出したが、その産生細胞であるマクロファージを除去した場合にもHD法による再活性化現象は認められた。また、リポポリサッカライドを投与することでIL6の産生を増大させた場合には再活性化は起こらず、IL6の関与はほぼ否定された。一方、活性酸素を消去するカタラーゼあるいはN-アセチルシステインの投与によりHD法による再活性化は抑制され、その一方で、四塩化炭素の投与により活性酸素を発生させることで再活性化が認められた。従って、活性酸素レベルの制御が、オンデマンド型遺伝子治療システムの実現には有望であることを示した。

寻找一个信号以重新连接遗传表达以实现“按需基因治疗系统”，该系统“反复”“反复”是“反复”的。该基因是使用瞬时质粒DNA（PDNA）通过水电动力学方法（HD方法）引入的，该方法迅速在静脉内静脉内施用了较大的容量，然后根据HD方法给予相等的溶液已经报道说，有一种对帐现象，其中表达降低了，并且振兴因子AP-1和NF-κB参与了这种和解现象。由于炎症细胞因子和活性氧被列为激活这些转录因子的典型因素，因此检查了炎性细胞因子和受重新连接影响的活性氧的影响。 HD方法发现，生产炎性细胞因子Interloykin 6（IL6），但是在去除巨噬细胞（产生的细胞）的情况下，HD方法得到了识别。此外，如果脂质糖的施用增加了IL6的产生，则不会进行概括，并且几乎拒绝了IL6的参与。另一方面，擦除活性氧的过氧化氢酶或N-乙酰半胱氨酸的施用已被抑制，而活性氧的再生已被氯化碳的施用观察到。因此，对活性氧水平的控制表明，实现按需遗传治疗系统的实现是有希望的。

项目成果

Positive correlation between the generation of reactive oxygen species and activation/reactivation of transgene expression after hydrodynamic injections into mice.

水动力注射小鼠后，活性氧的产生与转基因表达的激活/重新激活之间呈正相关。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Pharmaceutical Research
• 影响因子: 3.7
• 作者: Takiguchi N.;Takahashi Y.;Nishikawa M.;Matsui Y.;Fukuhara Y.;Oushiki D.;Kiyose K.;Hanaoka K.;Nagano T.;Takakura Y.
• 通讯作者: Takakura Y.