ヒト脳内長鎖cDNA解析データベースを基盤としたマウス扁桃体の情動神経機構の解明

基于人脑长链cDNA分析数据库阐明小鼠杏仁核情绪神经机制

基本信息

批准号：
13878163
负责人：
湯浅茂樹
金额：
$ 1.02万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry (2002)Chiba University (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

かずさDNA研究所のヒト脳内長鎖cDNAクローンライブラリーをもとに、そのマウスホモローグであるmKIAAクローンを作成し、これを用いてGST融合蛋白質を作成した。各クローンに対応する蛋白質に対するウサギポリクローン抗体を網羅的、系統的に作成し、マウス成体脳組織切片を用いて間接酵素抗体法による免疫組織化学染色を行ない発現様式のスクリーニングを行なった。約200個のクローンを解析し扁桃体ならびに関連した大脳辺縁系において特徴的な発現を示すものについて、さらに詳しい組織学的解析を行なった。抗体GX05は扁桃体基底外側核並びに海馬CA3のニューロン尖端樹状突起に強い局在性を示し、共焦点レーザー顕微鏡、免疫電顕的に後シナプス樹状突起内の微小管と結合して存在することが明らかになった。また抗体GX35、抗体GX165、抗体D02-1-1ROSは扁桃体中心核に局在し、特にGX35はニューロン尖端樹状突起に強い局在性を示した。さらに、GX50は外側核ではニューロンに、中心核、内側核ではニューロン周辺の構造に局在性を示した。上記のごとく、扁桃体の亜核や細胞内局在について特異性を示す抗体の作成に成功し各クローンの発現様式が明らかとなった。今後、扁桃体各亜核の機能解析、特に特定の亜核に遺伝子を発現させ、あるいは遺伝子発現を抑制する研究への応用が可能となった。ついで、これらのクローンの遺伝子ノックアウトマウスの作成をおこなった。各ノックアウトマウスは正常に出産し成長した。脳組織微細構造と行動異常の解析は現在進行中である。

基于 Kazusa DNA 研究所的人脑长链 cDNA 克隆文库，我们创建了其小鼠同源物 mKIAA 克隆，并用其创建了 GST 融合蛋白。全面、系统地制备针对每个克隆对应蛋白的兔多克隆抗体，并使用成年小鼠脑组织切片，采用间接酶抗体法，通过免疫组织化学染色筛选表达模式。分析了大约 200 个克隆，并对那些在杏仁核和相关边缘系统中表现出特征性表达的克隆进行了更详细的组织学分析。抗体GX05强烈定位于杏仁核基底外侧核和海马CA3的神经元顶端树突，共聚焦激光显微镜和免疫电子显微镜显示它与突触后树突中的微管有关。抗体GX35、抗体GX165和抗体D02-1-1ROS定位于杏仁核中央核，特别是GX35在神经元顶树突中表现出强烈的定位。此外，GX50 定位于外侧核的神经元以及中央核和内侧核的神经元周围的结构。如上所述，我们成功地制备了对杏仁核的亚核和细胞内定位具有特异性的抗体，并且阐明了每个克隆的表达模式。未来有可能将该方法应用于杏仁核各亚核的功能分析，特别是特定亚核中表达基因或抑制基因表达的研究。接下来，创建了这些克隆的基因敲除小鼠。每只敲除小鼠均正常分娩并生长。目前正在进行脑组织微观结构和行为异常的分析。