膵癌切除後のAdjuvant Cytokine Gene Therapy-ハムスター膵管癌を用いた基礎的研究-

胰腺癌切除后的辅助细胞因子基因治疗 - 使用仓鼠胰腺导管癌的基础研究 -

基本信息

批准号：
09877246
负责人：
田中雅夫
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877246/
关键词：
GM-CSF IFN-γ MCP-1 遺伝子治療アデノウイルス膵癌ハムスター

项目摘要

我々は予後が極めて不良な膵癌に対する免疫遺伝子治療に取り組んでおり、これまでに以下の成果をあげた。(1)in vitroにおけるサイトカイン発現の確認:ハムスター膵癌細胞に各組換えウイルス(IFN-γ、GM-CSF,MCP-1)をMOI 0、10、50、100の感染効率で感染させ毎日、7日後まで上清を採集、ELISAにてサイトカインの放出量を測定した、各サイトカインはMOI依存性に腫瘍細胞より放出され、3目目に最高レベルで放出され1週間後には極少量となった。(2)放出されるサイトカインの生物学的測定:IFN-γはvesicular stomatitis virus plaque inhibition assay, GM-CSFはマウス骨髄細胞を用いたcolony forming assay,MCP-1に対してはTHP-1 細胞(human monocyte)を用いた。chemotaxis assayにより測定した。放出された各サイトカインは生物学的活性をもつことが証明された。(3)in vitroにおける腫瘍増殖:24穴プレートの各wellに2x10^3個の細胞をまき2日後にウイルスをMOI0,10,50,100で感染させ細胞数を各群3穴ずつ、24時間おきに4日後まで計測した。IFN-γのみ腫瘍増殖をMOI依存性に抑制した。(4)in vivoにおける腫瘍増殖:6穴プレートに各ウェル1x105の腫瘍細胞をまき2日後にウイルスをMOI 100の感染効率で感染させ2時間後に100Gyのγ線照射を行い、その翌日ハムスターに腫瘍ワクチンとし1x10^6個の細胞を皮下に注入(n=10)、7日後に1x10^5個のγ線照射を行っていない腫瘍細胞を皮下にチャレンジした。腫瘍ワクチンの実験系においては、GM-CSFが1ヶ月後に95%の抗腫瘍効果を及ぼした。MCP-1及びIFN-γは効果が認められなかった。皮下移植腫瘍にてGM-CSFに抗腫瘍効果が認められたので、in vivoでの肝転移に対する効果についてGM-CSF遺伝子組換えウイルスを用いて現在検討中である。

We are working on immune gene therapy for pancreatic cancer, which has a very poor prognosis, and have achieved the following results so far: (1) Confirmation of cytokine expression in vitro: Hamster pancreatic cancer cells were infected with each recombinant virus (IFN-γ, GM-CSF, MCP-1) with MOIs of MOIs of 0, 10, 50, and 100, and supernatants were collected every day until 7 days后来，ELISA测量的细胞因子释放量。每种细胞因子以MOI依赖性方式从肿瘤细胞中释放出来，并在第三只眼中以最高水平释放，1周后导致很少的量。（2）释放细胞因子的生物学测量：IFN-γ是一种囊泡孔炎病毒斑块抑制测定法，GM-CSF是使用小鼠骨髓细胞形成的菌落，用于MCP-1。通过趋化测定法测量。每种释放的细胞因子都具有生物学活性。（3）体外肿瘤生长：2x10^3细胞在24孔板的每个孔中散布，2天后，病毒被MOIS感染为0、10、50、100，并且每24小时测量每24小时的细胞数量，直到4天后。只有IFN-γ以MOI依赖性方式抑制肿瘤生长。（4）体内肿瘤的生长：每个孔中的1x105个肿瘤细胞进入一个6孔板，2天后，该病毒被100的MOI感染，2小时后，100 Gy Gamma辐照被照射。第二天，将仓鼠用作肿瘤疫苗，皮下注射1x10^6细胞（n = 10），7天后，1x10^5未被γ辐照的肿瘤细胞受到挑战。在肿瘤疫苗的实验系统中，GM-CSF在1个月后发挥了95％的抗肿瘤作用。没有观察到MCP-1和IFN-γ的影响。由于GM-CSF在皮下移植的肿瘤中具有抗肿瘤作用，因此目前使用GM-CSF重组病毒对体内肝转移的影响。