Duchenne型筋ジストロフィーは低分子化合物により治療できるか?

杜氏肌营养不良症可以用低分子量化合物治疗吗？

基本信息

批准号：
22659194
负责人：
松尾雅文
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)の治療として、ジストロフィン遺伝子のアウトオブフレーム変異をインフレームに修正するエクソンスキッピング誘導治療が最も有望な方法として大きな注目を集めている。従来、このエクソンスキッピング誘導にはアンチセンスオリゴヌクレオチドという高分子化合物が用いられていた。本研究は、低分子化合物がこのエクソンスキッピングを誘導することを分子生物学的手法を駆使して実証するものである。そのために、ミニジーンを用いたin vitroスプライシング反応系を用いて低分子化合物のエクソンスキッピング誘導能について検討した。まず、標的とするエクソン配列を組み込んだミニジーンを作製した。作製したミニジーンをHeLa細胞に導入し、スプライシング反応を起こした。このスプライシング反応系に種々の低分子化合物を加え、そのエクソンスキッピング誘導作用を解析した。その結果、1つの低分子化合物があるナンセンス変異を有するエクソン31を配列特異的にエクソンスキッピング誘導することを明らかにした。この反応は時間あるいは量依存的であった。さらに、エクソン31内ナンセンス変異をもつ患者由来培養筋細胞にこの低分子化合物を導入したところ、ジストロフィンmRNAでエクソン31のスキッピングの増幅とジストロフィンタンパクの発現増が確認された。本研究成果は、DMDの治療として低分子化合物が応用できることを示す画期的なものであった。今後、本領域の研究の発展を促す重要な成果を得た。

外显子跳过诱导的疗法将肌营养不良蛋白基因的固定突变纠正为框架疗法，它引起了极大的关注，它是治疗Duchenne肌肉营养不良（DMD）的最有希望的方法。通常，一种称为反义寡核苷酸的聚合物化合物已用于诱导外显子跳动。这项研究表明，小分子化合物使用分子生物学技术诱导外显子跳过。为此，使用小分子化合物使用微型烯的体外剪接反应系统研究了小分子化合物诱导外显子跳过的能力。首先，创建了掺入目标外显子序列的微型基因。将制备的小山引入了HeLa细胞中，以引起剪接反应。将各种小分子化合物添加到该剪接反应系统中，并分析了其诱导外显子跳动的效果。结果，发现一种小分子化合物诱导外显子31，其无义突变，序列特异性诱导外显子跳过。反应取决于时间或数量。此外，当将该小分子引入外显子31中胡说八道突变患者的培养肌肉细胞中时，肌营养不良蛋白mRNA证实了外显子31跳过的扩增并增加了肌营养不良蛋白蛋白的表达。这项研究结果是开创性的证明，可以应用小分子化合物来治疗DMD。将来，我们取得了重要的成果，鼓励该领域的研究发展。