血清中DNAのマイクロサテライトを解析するがんの早期診断法の確立

血清DNA微卫星分析建立癌症早期诊断方法

基本信息

批准号：
09255234
负责人：
松尾雅文
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255234/
关键词：
マイクロサテライトがん PCR 不安定性

项目摘要

DNAのミスマッチ修復酵素に異常を有するがん組織では、マイクロサテライトの不安定性があることが明らかにされている。がんの進展にともないこうしたマイクロサテライト不安定性を有したDNAが血中に出現することが十分に予測されるが、これを効果的にとらえた報告は少ない。研究者らはヒトの最大の遺伝子であるジストロフィン遺伝子の解析に長く従事して、白血球中の超微量のジストロフィンmRNAを有効に抽出する方法を確立するとともに、PCRに重複PCRを応用することなどにより飛躍的に解析能力を向上させ、ジストロフィン遺伝子異常に関する世界的業績を次々挙げてきた。本研究では、こうした超微量mRNA解析技術を集積させ、血清中の微量のDNAを試料としたマイクロサテライトの解析法の確立をはかった。血清中のDNAの抽出には、採血した血液から細胞成分を十分に分離しその上清画分の血清を用いた。そして、特異性を挙げるとともにDNAの増幅効率をも増やすため、セミ重複PCRを応用することにより、血清中のDNAを増幅することに成功した。さらに、蛍光ラベルしたプライマーをPCR時に用いることにより蛍光でラベルされた増幅産物を得、この蛍光ラベル増幅DNAを自動DNAシークエンサーにて分析した。そして、増幅産物のマイクロサテライトについて解析したところ解析に十分に耐えうる増幅産物であることが判明した。現在、研究者らが発見したすでにがん組織においてマイクロサテライトの不安定性が明らかとなった患者で、患者の組織におけるマイクロサテライトの不安定性と血清中DNAの不安定性とが一致するか否かを検討している。本研究の成果は、血清を用いた画期的ながんの早期診断法の確立を大きく促進するものである。

在具有异常的DNA不匹配修复酶的癌组织中，微卫星的不稳定性已显示出来。随着癌症的进展，可以很好地预测，具有微卫星不稳定性的DNA会出现在血液中，但很少有报道有效地捕获了这一点。研究人员已经努力了很长时间来分析肌营养不良蛋白基因，即最大的人类基因，并建立了一种方法，可以从白血细胞中有效提取超树量的肌营养不良蛋白mRNA，并通过将重叠的PCR应用于PCR并列出了许多全球成就的Dysmator necement n abn d abn d abn的分析能力，并通过将重叠的PCR应用于PCR来大大提高其分析能力。这项研究旨在通过积累这些超树mRNA分析技术来建立一种使用痕量在血清中痕量的DNA分析微卫星的方法。为了从血清中提取DNA，将细胞成分与收集的血液充分分离，并使用了从上清液中的血清。此外，为了引用特异性并提高DNA扩增的效率，我们通过应用半重叠的PCR成功扩增了血清中的DNA。此外，通过在PCR期间使用荧光标记的底漆，获得了荧光标记的放大产物，并通过自动DNA测序仪分析了荧光标记的放大DNA。然后，发现放大产物微卫星的分析是可以充分承受分析的扩增产物。目前，研究人员发现癌症组织中的微卫星不稳定性，并且正在研究患者组织中的微卫星不稳定性是否与血清DNA不稳定性相吻合。这项研究的结果大大促进了使用血清建立突破性的早期癌症诊断方法。