Identification of chemicals that enhance expression of myoblast growth factor Dp71ab

鉴定增强成肌细胞生长因子 Dp71ab 表达的化学物质

• 批准号: 21K07875
• 负责人: 松尾 雅文
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kobe Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07875/
• 关键词: ジストロフィンDp71; 筋芽細胞増殖因子; エクソンスキッピング; ミニ遺伝子; デュシェンヌ型筋ジストロフィー; ジストロフィンDp71; 筋芽細胞増殖因子; エクソンスキッピング; ミニ遺伝子; デュシェンヌ型筋ジストロフィー

デュシェンヌ型筋ジストロフィー（D M D）は、進行性の筋萎縮症で筋芽細胞の枯渇による筋細胞の減少を特徴とする。筋芽細胞の増殖法の確立はD M Dの有力な治療法である。申請者は、ジストロフィンDp71の２エクソン欠失型アイソフォームであるDp71abが筋芽細胞の増殖因子であることを世界で初めて明らかにした。本研究は、Dp71abの産生を促すためエクソン７１と７８の２エクソンのスキッピングを同時に誘導する化合物を同定する。そのため、遠隔２エクソンのスプライシングを解析する２蛍光ミニ遺伝子を作製し、蛍光発光法を応用したハイスループット法によりその化合物を探索する。さらに、同定した化合物をヒト筋芽細胞に投与し、Dp71ab産生増加による細胞の増殖を明らかにする。その成果は、化合物を用いた筋芽細胞の増殖治療法の確立を大きく促進する。初年度において、遠隔２エクソンのスプライシングを解析する２蛍光ミニ遺伝子の作製を図った。すでにエクソンスキッピング検出を迅速容易にはかるmCherry赤色とeGFP緑色の2色蛍光発光ミニ遺伝子のFMv2を保有している。そこで、このFMv2をさらに改良し、遠隔２エクソンの スプライシングを同時にしかも定量的に解析する多エクソン２蛍光ミニ遺伝子の構築を目指した。まず、エクソン７１と７８の配列をそれぞれ別個にFMv2に挿入したミニ遺伝子を構築した。ところが、予想に反してエクソン７１と７８はともにスプライシングを受けなかった。これは、２つのエクソンがサイズの小さなミニエクソンであることに起因していると考え、FMv2に挿入する配列のサイズを変更したミニ遺伝子を各種作製し、最適のスプライシング解析系の構築を目指している。一方、DP71abが筋芽細胞特異的増殖因子であることを明らかにした成果をまとめ、論文として発表した。

Duchenne肌肉营养不良症（D M D）的特征是由于肌细胞萎缩而导致的肌细胞降低。建立一种增殖成肌细胞的方法是D MD的一种有希望的治疗方法。申请人在世界上首次透露，DP71AB是肌营养不良蛋白DP71的两种外观缺失亚型，是肌细胞的生长因子。这项研究确定了同时诱导两个外显子71和78外显子跳过的化合物，以促进DP71AB的产生。因此，产生了两荧光的微型基因来分析两种外观的剪接，并使用荧光发射方法通过高通量方法搜索化合物。此外，确定的化合物被施用到人肌细胞上，以揭示由于DP71AB产生增加而导致的细胞增殖。结果将大大促进使用化合物建立成肌细胞增殖治疗。在第一年，我们试图生成两个荧光小型素来分析遥控外显子的剪接。外显子跳过检测已被携带FMV2，这是一种两色荧光发射的微型基因，MCHERRY RED和EGFP绿色。因此，我们旨在进一步改善FMV2并构建一个多exon 2荧光微基因，同时且定量地分析了远程两个外显子的剪接。首先，构建了一个小基因，其中将外显子71和78的序列分别插入FMV2中。但是，与期望相反，外显子71也没有剪接78。这被认为是由于两个外显子是小型的迷你外观，我们的目标是创建各种迷你生成，并将插入FMV2的序列的大小和构造最佳剪接分析系统构建。同时，揭示DP71AB是肌细胞特异性生长因子的结果，并作为论文发表。