新しいイノシトール1,4,5-三リン酸結合蛋白質の機能解明

新型肌醇 1,4,5-三磷酸结合蛋白的功能阐明

• 批准号: 10169249
• 负责人: 平田 雅人
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10169249/
• 关键词: Ins(1,4,5)p_3; カルシウムイオン; ホスホリパーゼC; PHドメイン; シグナル伝達

分子量130kDaの新しいイノシトール1,4,5-三リン酸(Ins(1,4,5)P_3)結合蛋白質(p130)の機能を解明するため安定的にp130を発現する細胞株(COS-l:pl30)を作製した。発現したpl30はプレックストリン相同領域(PHドメイン)を有するものの、細胞膜ではなく、細胞質内に局在していた。COS-1:p130をブラジキニンや上皮成長因子などで刺激すると対照細胞に比べて、細胞内Ca^<2+>上昇が抑制された。この効果はPHドメインを欠いたp130分子の発現細胞では認められなかった。したがって、p130はホスホリパーゼC(PLC)-Ins(1,4,5)P_3を介した細胞機能の内在性阻害分子として作用する可能性がある。どのサブタイプのPLCと主に関わっているのかについて検索するため、in situハイブリダイゼーション法によってラット脳内のp130の分布を調べた。既報のPLC-βの分布と類似していた。今後検討すべき問題点として下記のことがあげられよう。(1)内在性にp130を有する細胞において発現しないような処理を施こすことによってPLC-Ins(1,4,5)P_3を介した細胞機能の活性化が認められるか、すなわち今年度に観察した結果の「逆も真」か?(2)p130の発現の調節機構の解明(3)p130がPLC-δ類似の分子でPHドメインを有することに関連した現象の解析(例えば、Ins(1,4,5)P_3産生や細胞内Ca^<2+>変化など)のみを行ったが、それとは全く無関係の現象あるいは未知の現象に関わる可能性を調べるためにも、ノックアウトマウスの作製を急ぐ必要がある。現在キメラマウスの段階にまで到達した。

为了阐明分子量为130 kDa的新型肌醇1,4,5-三磷酸（Ins(1,4,5)P_3）结合蛋白（p130）的功能，我们开发了稳定表达p130的细胞系(COS-1：pl30)被创建。虽然表达的pl30具有pleckstrin同源区(PH结构域)，但它定位于细胞质而不是细胞膜。当用缓激肽或表皮生长因子刺激COS-1:p130时，与对照细胞相比，细胞内Ca 2+ 的增加受到抑制。在表达缺乏 PH 结构域的 p130 分子的细胞中没有观察到这种效应。因此，p130 可能充当磷脂酶 C (PLC)-Ins(1,4,5)P_3 介导的细胞功能的内源性抑制分子。为了找出主要涉及 PLC 的哪种亚型，我们使用原位杂交研究了 p130 在大鼠大脑中的分布。该分布与之前报道的 PLC-β 相似。今后应考虑以下问题。 (1) 通过应用阻止具有内源性 p130 的细胞中 p130 表达的处理，是否可以观察到通过 PLC-Ins(1,4,5)P_3 激活细胞功能？ (2) 阐明这些结果是否也成立？ p130 表达的调控机制 (3) p130 是一个 PLC-我们只分析了与δ类似的分子中具有PH结构域相关的现象（例如Ins(1,4,5)P_3的产生和细胞内Ca^<2+>的变化），但这与此完全不同。迫切需要创建基因敲除小鼠，以研究这是否与不相关或未知现象有关。我们现在已经达到了嵌合小鼠的阶段。