イノシトールリン脂質代謝と小胞体からのCa^<2+>遊離機構の研究

肌醇磷脂代谢及内质网Ca^2+释放机制研究

基本信息

批准号：
60223024
负责人：
平田雅人
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60223024/
关键词：
マクロファージ小胞体【Ca^(2+)】遊離 Ins【P_3】光親和標認

项目摘要

イノシトール1,4,5-三リン酸(Ins【P_3】)によるマクロファージ(Mφ)小胞体からの【Ca^(2+)】遊離機構を検討し、小胞体上のIns【P_3】受容分子を光親和標識するためのIns【P_3】の光感受性誘導体を合成した。1.Ins【P_3】による【Ca^(2+)】遊離機構の解明:小胞体膜は本来【Ca^(2+)】に対して不透過性で、膜が強い拡散障壁となっている。Ins【P_3】による速い【Ca^(2+)】遊離はこの拡散障壁の破壊を意味する。この原因として、【◯!1】【Ca^(2+)】ポンプの抑制、【◯!2】小胞体の【Ca^(2+)】保持能の低下、【◯!3】【Ca^(2+)】透過性の亢進等が考えられた。【Ca^(2+)】ポンプ活性を完全に抑制する濃度のバナジン酸を添加したり、あるいはアピラーゼやヘキソキナーゼによってATPを枯渇したりすることによる【Ca^(2+)】遊離は極めて緩徐であり、またIns【P_3】は小胞体への受動的【Ca^(2+)】流入も促進した。これらの結果は上記【◯!3】の可能性、すなわちIns【P_3】により小胞体膜の【Ca^(2+)】透過性が亢進することを強く示唆する。そして低温にしてもIns【P_3】の効果は影響されないことから担体ではなく、チャンネルを介した透過性亢進であると考えられた。2.Ins【P_3】の光感受性誘導体の合成と利用:光感受性基としてP-アジド安息香酸(pAB)を用い、カルボニルジイミダゾールを触媒としてIns【P_3】と混和する。セルロース薄層クロマトグラフィーによって分離するとIns【P_3】のRfは0.20であるのに対して0.50のところにIns【P_3】-pABを得た。収率は約10%でIns【P_3】とpABのモル比は約1:1であった。既報のサポニン処理Mφ(S-Mφ)をIns【P_3】-pABとともに紫外線照射した後、S-Mφを洗浄した。このS-Mφを用いて【Ca^(2+)】輸送を調べると、Ins【P_3】による【Ca^(2+)】遊離はもはや認められなかった。【Ca^(2+)】遊離の抑制は、S-MφをIns【P_3】やpABとともに紫外線照射した時や、また Ins【P_3】-pABとともに10倍量のIns【P_3】を添加した時にも認められなかった。

我们研究了肌醇1,4,5-三磷酸(Ins[P_3])从巨噬细胞内质网(Mφ)释放[Ca^(2+)]的机制，并研究了[Ca^(2+)]的释放机制。 +)]来自巨噬细胞的内质网(Mφ)，合成了用于光亲和标记的Ins[P_3]的光敏衍生物。 1. 阐明Ins[P_3]释放[Ca^(2+)]的机制：内质网膜原本对[Ca^(2+)]是不可渗透的，该膜起到了强大的扩散屏障的作用。 Ins [P_3] 快速释放 [Ca^(2+)] 意味着这种扩散势垒的破坏。其原因包括[○!1][Ca^(2+)]泵受到抑制、[○!2]内质网的[Ca^(2+)]滞留能力降低、[○! 3] [Ca^(2+)] 考虑渗透性增加。通过添加完全抑制泵活性的浓度的钒酸盐或通过腺苷三磷酸双磷酸酶或己糖激酶消耗 ATP 来释放 [Ca^(2+)] 也极其缓慢地促进被动 [Ca]。 ^(2+)]流入内质网。这些结果强烈暗示了上述[○!3]的可能性，即Ins[P_3]增加了内质网膜对[Ca^(2+)]的通透性。由于即使在低温下Ins[P_3]的效果也不受影响，因此认为磁导率是通过沟道而非载流子增强的。 2.Ins【P_3】光敏衍生物的合成与利用：以对叠氮基苯甲酸（pAB）为光敏基团，以羰基二咪唑为催化剂与Ins【P_3】混合。通过纤维素薄层色谱分离得到Ins[P_3]-pAB，Rf为0.50，而Ins[P_3]的Rf为0.20。收率约为10%，Ins[P_3]与pAB的摩尔比约为1:1。将先前报道的皂苷处理的Mφ(S-Mφ)与Ins[P_3]-pAB一起用紫外线照射后，洗涤S-Mφ。当使用该 S-Mφ 研究 [Ca^(2+)] 运输时，不再观察到 Ins[P_3] 释放 [Ca^(2+)]。当S-Mφ与Ins[P_3]和pAB一起用紫外线照射时，以及当与Ins[P_3]-pAB一起添加10倍量的Ins[P_3]时，[Ca^(2+)]释放受到抑制也没有被认可。