ゼブラフィッシュ胚における活動依存的な脊椎介在ニューロン形成

斑马鱼胚胎中活动依赖性脊髓中间神经元的形成

• 批准号: 06F06423
• 负责人: 川上 浩一
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06423/
• 关键词: 分子生物学; 発生遺伝学; ゼブラフィッシュ; トランスポゾン; テタナス毒素; 脊椎神経; 遺伝子トラップ; トランスジェニックフィッシュ; 挿入変異; 転移酵素; トランスジェニック動物

1.To12トランスポゾンベクターに、スプライスアクセプター部位、Ga14遺伝子、SV40ポリAシグナルを組み込んだ遺伝子トラップコンストラクトを、ゼブラフィッシュゲノムにランダムに挿入させ、Ga14を脊椎内介在神経特異的に発現するトランスジェニックフィッシュ約50系統の分離、同定、系統化を行った。2.フグevx1遺伝子のエンハンサーを単離し、To12転移システムを用いた遺伝子導入により介在神経特異的にGa14を発現するトランスジェニックフィッシュ系統を作製した。3.Ga14の認識配列UASの下流にテタナス毒素遺伝子と青色蛍光蛋白質CFP遺伝子の融合遺伝子を組み込んだトランスジェニックフィッシュ系統を樹立した。また、UASの下流にボツリヌス毒素遺伝子とGFP遺伝子の融合遺伝子を組み込んだトランスジェニックフィッシュ系統を樹立した。これらエフェクター系統が神経機能の阻害に有効であることを明らかにした。4.熱ショックプロモーターの下流にCre遺伝子を組み込んだトランスジェニックフィッシュを作製した。この系統と毒素遺伝子の上流にLoxP部位ではさまれたRFP遺伝子をもつ系統と組み合わせることにより、熱ショック依存的に毒素遺伝子を発現するシステムの構築を行った。5.遺伝子トラップ系統の解析によりNotchシグナル伝達に重要なDeltaA遺伝子の変異体を同定した。DeltaA遺伝子が脊椎動物の初期発生に必須であることを示した。

1。结合剪接受体位点，GA14基因和SV40 PolyA信号的基因陷阱构建体被随机插入斑马鱼基因组中，并且在脊柱中间神经元中特异性表达GA14的大约50个转基因鱼类菌株被分离，鉴定，鉴定和系统化。 2。分离了Pufferfish EVX1基因的增强子，并制备了转基因鱼线，该鱼系使用TO12转移系统通过基因转移在中间神经元中专门表达GA14。 3。建立了一个转基因鱼类线，结合了破伤风毒素基因的融合基因和GA14识别序列UAS下游的蓝色荧光蛋白CFP基因。此外，在UAS的下游建立了转基因鱼线，并在肉毒杆菌毒素基因和GFP基因之间结合了融合基因。已经揭示了这些效应子菌株可有效抑制神经功能。 4。创建了转基因鱼，其中CRE基因被整合到热激启动子的下游。通过将这条线与一条线与包含毒素基因上游的RFP基因的线相结合，该系统以热激依赖方式构建了毒素基因的系统。 5。分析基因陷阱线鉴定出三角洲基因的突变体，这对于缺口信号很重要。我们已经表明，三角洲基因对于脊椎动物的早期发育至关重要。

项目成果

トランスポゾンを用いたGa14-UAS法による細胞の可視化と機能改変

使用转座子的 Ga14-UAS 方法对细胞进行可视化和功能修饰

• 发表时间: 2007
• 作者: Kawakami;K.
• 通讯作者: K.

Genetic dissection of neural circuits by To12 transposon-mediated Ga14 gene and enhancer trapping in zebrafish

To12转座子介导的Ga14基因和增强子捕获斑马鱼神经回路的遗传解剖

• 发表时间: 2008
• 期刊: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105
• 作者: Asakawa;K.
• 通讯作者: K.

Genetic Dissection of Neural Circuits by To12 Transposon-Mediated Ga14 and Enhancer Trapping in Zebrafish

To12 转座子介导的 Ga14 和增强子捕获斑马鱼神经回路的遗传解剖

• 发表时间: 2008
• 作者: Asakawa;K.
• 通讯作者: K.

Visualization in zebrafish larvae of Na+ uptake in mitochondrion-rich cells whose differentiation is dependent on foxi3a

斑马鱼幼虫富含线粒体的细胞中 Na 吸收的可视化，其分化依赖于foxi3a

• 发表时间: 2007
• 期刊: American Journal of Physiology : Regulatory Integrative and Comparative Physiology 292
• 作者: Scott;E.K.;浦崎明宏;浅川和秀;Jae-Yeon Jeong;Masahiro Esaki
• 通讯作者: Masahiro Esaki