ゼブラフィッシュの挿入変異生成法による脊椎動物遺伝子の機能解析

使用斑马鱼插入诱变方法进行脊椎动物基因的功能分析

基本信息

批准号：
16011259
负责人：
川上浩一
金额：
$ 4.16万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)メダカTo12因子を改変し、トランスポゾンベクターの開発を行った。このトランスポゾンベクターにスプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子、SV40のポリAシグナルを組み込んだ遺伝子トラップベクターを構築した。次に転移酵素をコードするmRNAを試験管内で合成し、遺伝子トラップ下クターをもつプラスミドDNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵内へ微量注入により導入した。(2)微量注入を施された胚を成魚にまで育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュを得た。それら次世代ゼブラフィッシュ胚を実体蛍光顕微鏡下で観察することにより、GFPを組織特異的、器官特異的に発現するトランスジェニックゼブラフィッシュを合計75系統分離した。(3)これらゼブラフィッシュ系統について、トランスポゾン挿入部位のインバースPCRによる解析を行った。その結果、51のトランスポゾン挿入をゼブラフィッシュゲノム上にマップすることができた。(4)これらゼブラフィッシュ系統について、トランスポゾン挿入がトラップしている遺伝子の5'RACEによる解析を行った。その結果、発生段階で組織特異的、器官特異的に発現している16の新規遺伝子を発見した。(5)これらトランスポゾン挿入をもつヘテロ2倍体フィッシュをかけあわせ、ホモ2倍体胚を作製し、表現型の解析を行った。その結果、劣性致死を引き起こすトランスポゾン挿入を1つ同定した。

(1)我们修饰了青鳉To12因子并开发了转座子载体。通过将剪接受体位点、作为报告基因的GFP基因和SV40的polyA信号整合到该转座子载体中，构建了基因捕获载体。接下来，在试管中合成编码转移酶的 mRNA，并通过显微注射与含有基因捕获载体的质粒 DNA 一起导入斑马鱼受精卵。 (2)显微注射胚胎发育成成虫，通过繁殖获得下一代斑马鱼。通过在立体荧光显微镜下观察这些下一代斑马鱼胚胎，我们总共分离出了 75 个以组织特异性和器官特异性方式表达 GFP 的转基因斑马鱼品系。 (3)对于这些斑马鱼品系，通过反向PCR分析转座子插入位点。结果，我们能够将 51 个转座子插入映射到斑马鱼基因组上。 (4)对于这些斑马鱼品系，通过5'RACE分析转座子插入捕获的基因。结果，我们发现了 16 个在发育过程中以组织特异性和器官特异性方式表达的新基因。 (5)通过将这些异二倍体鱼与转座子插入杂交，我们产生了同源二倍体胚胎并分析了它们的表型。结果，我们发现了一个导致隐性致死的转座子插入。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Excision of the Tol2 transposable element of the medala fish Oryzias latipes in Xenopus laevis and Xenopus tropicalis

非洲爪蟾和热带爪蟾中 Medala 鱼 Oryzias latipes 的 Tol2 转座元件的切除

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Gene 338
影响因子：
0
作者：
Kawakami;K.;Imanaka;K.;Itoh;M.;Taira;M.
通讯作者：
M.

The zebrafish pob gene encodes a novel protein required for survival of red cone photoreceptor cells

斑马鱼 pob 基因编码红锥感光细胞生存所需的新型蛋白质

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Genetics 170
影响因子：
0
作者：
Taylor;M.R.;Kikkawa;S.;Diez-Juan;A.;Ramamurthy;V.;Kawakami K..Carmeliet;P.;Brockerhoff;S.E.
通讯作者：
S.E.

DNA transposons in vertebrate functional genomics

DOI：
10.1007/s00018-004-4232-7
发表时间：
2005-03-01
期刊：
CELLULAR AND MOLECULAR LIFE SCIENCES
影响因子：
8
作者：
Miskey, C;Izsvák, Z;Ivics, Z
通讯作者：
Ivics, Z

A transposon-mediated gene trap approach identifies developmentally regulated genes in zebrafish

DOI：
10.1016/j.devcel.2004.06.005
发表时间：
2004-07-01
期刊：
DEVELOPMENTAL CELL
影响因子：
11.8
作者：
Kawakami, K;Takeda, H;Mishina, M
通讯作者：
Mishina, M

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川上浩一其他文献

Generation of albino-transgenic zebrafish using tRNA-based multiplexed sgRNA expression

使用基于 tRNA 的多重 sgRNA 表达生成白化转基因斑马鱼

DOI：
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
0
作者：
白木　知也;武藤彩;川上浩一;Tomoya Shiraki and Koichi Kawakami;Tomoya Shiraki and Koichi Kawakami;Tomoya Shiraki and Koichi Kawakami
通讯作者：
Tomoya Shiraki and Koichi Kawakami