悪性グリオーマにおけるDNA二重鎖切断修復遺伝子制御による新規放射線療法の開発

开发基于DNA双链断裂修复基因调控的恶性胶质瘤新放射疗法

基本信息

批准号：
17790974
负责人：
原田広信
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790974/
关键词：
Ku70 Ku80 siRNA HVJ-E vector グリオーマ

项目摘要

DNA二重鎖切断の重要な修復機構である「非相同末端結合修復」に関わるKu70及びKu80の悪性グリオー射線抵抗性への関与を解明し、Ku70及びKu80に対するsiRNAを用いてDNA修復機構を制御することが、悪性グリオーマの放射線感受性をさらに高めた新たな治療法と成り得るか否かを検討した。これまでに、グリオーマ手術標本を用いて、DNA修復関連遺伝子が悪性グリオーマにおいて過剰に発現し、放射線治療抵抗性の主因であることを報告してきた。そこでKu70及びKu80に対するsiRNAを作成し、グリオーマ細胞株におけるKu70及びKu80 mRNA/蛋白発現が抑制されることを確認し、今後のヒトへの臨床応用を目指して、HVJ-Eベクターを用いた導入実験を行った。まず、導入効率及び細胞毒性の検討を行い、次にグリオーマ細胞株においてHVJ-EベクターによりKu70及びKu80に対するsiRNAを導入し、colony forming assayを用いて放射線作用増強効果を確認した。In vivo実験ではヒトグリオーマ皮下腫瘍モデルを作成し、HVJE-vectorにより高率に導入されたKu70及びKu80に対するsiRNAより放射線治療効果が増強されることを確認した。HVJ-Eベクターを用いてKu70及びKu80 siRNAを導入することで、安全にDNA修復機構を制御でき、ヒト悪性グリオーマにおける放射線感受性を高めた新たな治療法と成り得る可能性を証明した。

阐明Ku70和Ku80参与的“非同源末端连接修复”，这是DNA双链断裂的重要修复机制，在恶性胶质瘤的辐射抵抗中的参与，并利用siRNA控制DNA修复机制来对抗我们研究了这是否可以成为一种进一步增加恶性胶质瘤放射敏感性的新治疗方法。迄今为止，我们利用胶质瘤手术标本报道，DNA修复相关基因在恶性胶质瘤中过度表达，是放疗抵抗的主要原因。因此，我们创建了Ku70和Ku80的siRNA，确认了Ku70和Ku80 mRNA/蛋白质表达在神经胶质瘤细胞系中受到抑制，并使用HVJ-E载体进行了导入实验，目的是将来应用于人类。首先，我们检查了导入效率和细胞毒性，然后使用HVJ-E载体将针对Ku70和Ku80的siRNA导入神经胶质瘤细胞系中，并使用集落形成试验证实了增强放射性的效果。在体内实验中，我们创建了人胶质瘤皮下肿瘤模型，并证实通过HVJE载体高效率导入针对Ku70和Ku80的siRNA可增强放射治疗效果。通过使用 HVJ-E 载体引入 Ku70 和 Ku80 siRNA，我们能够安全地控制 DNA 修复机制，证明了提供一种增加人类恶性胶质瘤放射敏感性的新治疗方法的可能性。

项目成果

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PTEN gene transfer suppresses the invasive potential of human malignant gliomas by regulating cell invasion-related molecules.

DOI：
10.3892/ijo.29.1.73
发表时间：
2006-07
期刊：
International journal of oncology
影响因子：
5.2
作者：
Koji Furukawa;Y. Kumon;H. Harada;S. Kohno;S. Nagato;Mikio Teraoka;Satoshi Fujiwara;Kou Nakagawa;K. Hamada;T. Ohnishi
通讯作者：
Koji Furukawa;Y. Kumon;H. Harada;S. Kohno;S. Nagato;Mikio Teraoka;Satoshi Fujiwara;Kou Nakagawa;K. Hamada;T. Ohnishi

Silencing hypoxia-inducible factor-lalpha inhibits cell migration and invasion under hypoxic enviroment in malignant gliomas.

沉默缺氧诱导因子-lα可抑制恶性胶质瘤缺氧环境下的细胞迁移和侵袭。