悪性グリオーマにおけるラミニン-8アンチセンスによる腫瘍血管新生抑制に関する研究

反义层粘连蛋白8抑制恶性胶质瘤肿瘤血管生成的研究

• 批准号: 15790770
• 负责人: 原田 広信
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790770/
• 关键词: グリオーマ; ラミニン-8; 腫瘍血管新生; アンチセンス

悪性グリオーマではラミニン-8が腫瘍血管周囲に高発現しており、グリオーマの血管新生に重要な役割を果たしているものと考えられ、ラミニン-8をターゲットとした新たな治療戦略の展開が期待される。本研究では、ラミニン-8のグリオーマにおける発現様式及び血管新生との関連性や、アンチセンスを用いたラミニン-8発現抑制による腫瘍血管新生・腫瘍増殖への影響について検討した。ヒトグリオーマ組織においてラミニン-8(α-4鎖)は腫瘍血管基底膜に高発現しており、low-gradeグリオーマに比べhigh-gradeグリオーマで有意に発現が亢進していた。また、ラミニンα-4鎖発現強度と腫瘍血管密度との間には強い相関がみられた(r=0.71、p<0.001)。次に、ラミニンα-4鎖に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド(モルフォリノオリゴ、26Mer)を作成し、グリオーマ細胞株にEPEI法で導入した。α-4アンチセンス導入により、グリオーマ細胞の増殖能には影響なくα-4鎖蛋白発現は完全に抑制されたが、新生血管は形成された。新生血管周囲には血液の漏出がみられ、電子顕微鏡にて血管基底膜の形成不全が観察された。In vivo実験では、アンチセンスによるラミニンα-4鎖発現抑制により、蛍光標識したグリオーマ細胞の新生血管に沿う進展が完全に抑制された。ラミニンα-4鎖の発現は腫瘍血管密度と有意な相関があり、ラミニン-8は血管基底膜の形成により腫瘍血管を成熟化させ、グリオーマの新生血管に沿った腫瘍進展に強く関与していると考えられた。

Laminin-8在恶性胶质瘤的肿瘤血管周围高表达，被认为在胶质瘤血管生成中发挥重要作用，并且有望开发针对Laminin-8的新治疗策略。在本研究中，我们研究了胶质瘤中laminin-8的表达模式及其与血管生成的关系，以及使用反义抑制laminin-8表达对肿瘤血管生成和肿瘤生长的影响。在人胶质瘤组织中，层粘连蛋白8（α-4链）在肿瘤血管基底膜中高表达，且与低级别胶质瘤相比，高级别胶质瘤中其表达显着升高。此外，层粘连蛋白α-4链表达强度与肿瘤血管密度之间存在很强的相关性（r=0.71，p<0.001）。接下来，使用 EPEI 方法创建针对层粘连蛋白 α-4 链的反义寡核苷酸（吗啉代寡核苷酸，26Mer）并将其引入神经胶质瘤细胞系中。 α-4反义的引入完全抑制了α-4链蛋白的表达，不影响胶质瘤细胞的增殖能力，但形成了新的血管。在新生血管周围观察到血液渗漏，并且使用电子显微镜观察到血管基底膜的形成有缺陷。在体内实验中，使用反义抑制层粘连蛋白α-4链表达完全抑制了荧光标记的神经胶质瘤细胞沿着新血管的进展。人们认为，层粘连蛋白α-4链的表达与肿瘤血管密度显着相关，并且层粘连蛋白8通过血管基底膜的形成使肿瘤血管成熟，并强烈参与神经胶质瘤中沿着新生血管的肿瘤进展。