分子遺伝子的アプローチによる新規染色体構造調節因子の同定及び機能解析

使用分子遗传学方法鉴定和功能分析新型染色体结构调节因子

• 批准号: 04F04453
• 负责人: 加藤 茂明
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04453/
• 关键词: PEV; androgen receptor; クロマチン変換される因子; 染色体構造調節因子; Androgen Receptor; ARレポーター遺伝子(AR); Position Effect Variegation(PEV)解析系; Non-stop; Mu-2; Boule; ARレポーター遺伝子(ARE); PEV; androgen receptor; クロマチン変換される因子; 染色体構造調節因子; Androgen Receptor; ARレポーター遺伝子(AR); Position Effect Variegation(PEV)解析系; Non-stop; Mu-2; Boule; ARレポーター遺伝子(ARE)

ヘテロクロマチンおよびユークロマチン状態と転写頻度との相関を示すPosition Effect Variegation(PEV)解析系を構築した。ショウジョウバエp因子存在下にてp因子応答配列があらゆるゲノム上へランダム転移が可能である性質を利用し、複眼色素の強弱により染色体構造状態を検討する。まず遺伝的白眼をもつショウジョウバエ条件下でp因子応答配列内に赤眼となる遺伝子をAndrogen Receptor(AR)応答配列下流に構築したARレポーター遺伝子(ARE)を導入した。その結果、ユークロマチンにAREを挿入されたショウジョウバエを作出ことに成功した。このARE遺伝子発現ショウジョウバエを用い、P因子によって、ランダムにAREを転移させ、ヘテロクロマチンおよびユークロマチンにAREが挿入された複数のショウジョウバエ系統を同定した。このARE遺伝子導入位置がユークロマチン領域であればアンドロゲン依存的に複眼は赤色を呈すが、ヘテロクロマチン領域であれば転写は抑制化状態にあり、赤目遺伝子の発現は抑制される。すなわちアンドロゲン依存的にレポーター遺伝子位置の染色体構造状態を個体レベルで視覚的に把握できる解析系の構築に成功した。現在、この解析系を用い、アンドロゲン依存的にクロマチン変換される因子の取得のため、スクリーニングを行った。その結果、DNA damage repair、Spermatogenesis、およびDeubiquitinationと関連因子などを取得した。今、この解析系からこれら染色体状態で必要とされる染色体構造調節因子を遺伝学的に詳しい解析を行っている。一方で、ショウジョウバエのほかのchromosome領域で、未知のクロマチン変換される因子の取得のため、スクリーニングを行っている。

构建了位置效应变化（PEV）分析系统，以显示异染色质与构染色质状态和转录频率之间的相关性。在果蝇存在下，使用P因子响应序列可以随机转移到任何基因组上，根据复合眼颜料的强度检查染色体结构状态。首先，在具有遗传白眼的果蝇条件下，引入了AR报告基因，其中引入了雄激素受体（AR）反应序列下游构建红眼基因。结果，我们成功地生产了果蝇，将其插入斑塑素中。使用该果蝇表达为基因，由因子P随机转移，并将多种果蝇菌株插入异染色质中，并鉴定出斑组素。如果这是基因转移位置在圣染色质区域，则复合眼是雄激素依赖性的红色，但是如果它在异染色质区域，则转录处于抑制状态，并且红眼基因的表达被抑制。换句话说，我们成功地构建了一个分析系统，该系统允许以依赖雄激素依赖性方式在单个层面的记者基因位置的染色体结构状态。当前，该分析系统用于筛选以雄激素依赖性方式转换染色质的因子。结果，获得了DNA损伤修复，精子发生和去泛素化和相关因素。当前，这些分析系统正在进行这些染色体状态所需的染色体结构调节剂的详细遗传分析。另一方面，在果蝇的其他染色体区域进行筛查，以获得未知的染色质转换因子。