タンキラーゼ・TAB182の生理機能とその制御機構

端锚聚合酶/TAB182的生理功能及其调控机制

基本信息

批准号：
15770114
负责人：
清宮啓之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770114/
关键词：
タンキラーゼ TAB182 PARP ADP-リボシル化結合蛋白質

项目摘要

染色体末端に位置するテロメアは、DNA2本鎖切断とは厳密に区別され、末端複製問題に対するゲノム上の緩衝地帯としても必須である。細胞分裂に伴うテロメアの短縮は癌抑制機構の一翼を担い、テロメア合成酵素であるテロメラーゼの活性化は癌細胞の無限増殖能の根拠となる。ポリ(ADP-リボシル)化酵素ファミリーに属するタンキラーゼ1は、テロメア伸長抑制因子TRF1をポリ(ADP-リボシル)化してこれをテロメアDNAから遊離させ、テロメラーゼの働きを促進する。タンキラーゼ1はテロメアのみならずゴルジ体や分裂期の中心体にも存在するが、その生理的意義は不明である。我々は、タンキラーゼ1とその結合蛋白質TAB182の相互作用によって司られる生理機能を明らかにすべく、以下の検討を行った。(1)TAB182コンベンショナルノックアウトマウスの作出を目指し、マウスTAB182ゲノムDNAクローンを用いてターゲティングベクターを作製した。同ベクターをマウスES細胞に導入し、計205クローンのうち相同組換え体を9クローン単離した。今後、相同組換えES細胞をブラストシストに注入し、これを偽妊娠マウスに移植してキメラマウスを取得する予定である。(2)マウスTRF1はタンキラーゼ1結合モチーフを持たず、事実タンキラーゼ1との相互作用は認められなかった。一方、TAB182分子内のタンキラーゼ1結合モチーフはヒトとマウスで保存されており、TAB182はテロメアDNAと結合しなかったため、タンキラーゼ1・TAB182複合体はタンキラーゼ1・TRF1複合体とは全く異なる生理機能を有する可能性が示唆された。(3)タンキラーゼ1が細胞分裂期特異的にリン酸化修飾を受けることを見出した。現在、同リン酸化に直接関与する因子の同定および同リン酸化の生物学的意義について検討中である。

端粒位于染色体的末端，严格与DNA2绞合的断开连接，也是末端双重基因组上的缓冲区必不可少的。与细胞分裂相关的端粒的缩短是癌症抑制机制的一部分，端粒酶（一种端粒合成酶）的激活是癌细胞无限生长的基础。 Tankirase 1属于端粒抑制因子（ADP-丙酰基）的聚（ADP-核糖基）酶家族，聚（ADP-核糖），将其与端粒DNA分开，以促进端粒酶的工作。 Tankirase 1不仅存在于端粒中，而且存在于高尔基体和分裂时期的中心，而且其生理意义尚不清楚。我们已经检查了以下检查，以阐明罐头脂肪酸酶1及其结合蛋白TAB182的生理功能。（1）TAB182使用鼠标TAB182基因组DNA克隆创建靶向向量，旨在创建TAB182常规敲除鼠标。将载体引入小鼠ES细胞，并将9个克隆与总共205个克隆分离。将来，我们计划将局部重组ES细胞注入爆炸囊肿，将其移植到假妊娠小鼠中以获得嵌合体小鼠。（2）小鼠TRF1没有Tankirase 1结合基序，实际上与Tankirase 1没有相互作用。另一方面，TAB182分子中的罐头1结合基序储存在人类和小鼠中，由于TAB182与端粒DNA没有结合，因此Tankirase 1 / Tab182复合物与Tankirase 1 / Trf1复合物完全不同被建议是。（3）我发现坦克拉斯1专门应用于细胞分裂周期。我们目前正在研究直接参与磷酸化的因素以及同一磷酸化的生物学意义。