プリオンの増殖を規定する正常型-異常型プリオン蛋白質の分子間相互作用に関する研究

调节朊病毒增殖的正常和异常朊病毒蛋白之间的分子间相互作用研究

• 批准号: 13226004
• 负责人: 堀内 基広
• 金额: --
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226004/
• 关键词: プリオン; スクレイピー; 伝達性海綿状脳症; 構造転換; PrPSc; 合成ペプチド; モノクロナール抗体

病原性プリオン蛋白質(PrPSc)と正常型プリオン蛋白質(PrPC)が直接会合することが、PrPScの増殖の第一段階である。そこで、PrPCとPrPScの結合に関与するPrP分子上のドメインを調べることを目的として、各種PrP合成ペプチドがPrPC-PrPSc間の相互作用を阻害するか否かについて検討した。PrPCがPrPSc存在下でPrPSc様のProteinase K(PK)抵抗性分子(PrP-res)に転換する試験管内転換反応で、PrP合成ペプチドaa117-141、aa166-179、aa200-223はPrPCがPrP-resに転換するのを阻害した。これらのPrPペプチドはPrPCと結合することにより、PrPCとPrPScの結合を阻害することが判明した。結合阻害活性を示すPrPペプチドは反応条件下ではβシート構造をとる傾向があることから、PrPペプチドがPrPScのPrPCへの結合ドメインを模倣することでPrPCと結合し、PrPC上のPrPSc結合ドメインを占拠する結果、PrPCとPrPScの結合を阻害する可能性が示唆された。PrPCとPrPScの分子間相互作用を解析する道具として、PrP分子に対するモノクローナル抗体(mAb)パネルを作製した。計34のmAbは認識するエピトープから9群に分類された。グループI〜VIはPrP分子上のリニアエピトープを認識する抗体、グル-プVII、VIIIはPrP分子上の構造エピトープを認識する抗体であった。また、グループIXはPrPSc特異的エピトープを認識する抗体である可能性が強く示唆された。aa59-89のリニアエピトープを認識するmAb、aa143-151を認識するmAb、およびaa1555-231領域内の構造エピトープを認識するmAbはプリオン感染細胞におけるPrPScの合成を阻害した。これらの抗体は細胞膜上に発現するPrPCと強く反応することから、抗体が細胞膜上のPrPCと結合することで正常なPrPC代謝経路が影響を受けるために、PrPSc合成の基質となるPrPCの供給が阻害された結果であると考えられる。

致病性朊病毒蛋白 (PrPSc) 和正常朊病毒蛋白 (PrPC) 的直接关联是 PrPSc 增殖的第一步。因此，为了研究PrP分子上参与PrPC和PrPSc结合的结构域，我们研究了各种PrP合成肽是否抑制PrPC和PrPSc之间的相互作用。在体外转化反应中，在 PrPSc、PrP 合成肽 aa117-141、aa166-179 和 aa200-223 存在的情况下，PrPC 转化为 PrPSc 样蛋白酶 K (PK) 抗性分子 (PrP-res)被抑制转换为水库。发现这些 PrP 肽通过与 PrPC 结合来抑制 PrPC 和 PrPSc 之间的结合。由于表现出结合抑制活性的PrP肽在反应条件下倾向于采用β-折叠结构，因此PrP肽通过模仿PrPSc与PrPC的结合结构域而与PrPC结合，并且由于占据而与PrPC上的PrPSc结合结构域结合。 ，表明PrPC和PrPSc之间的结合可能被抑制。作为分析 PrPC 和 PrPSc 之间分子间相互作用的工具，我们创建了一组针对 PrP 分子的单克隆抗体 (mAb)。总共 34 种 mAb 根据其识别的表位分为 9 组。 I至VI组是识别PrP分子上的线性表位的抗体，VII和VIII组是识别PrP分子上的结构表位的抗体。此外，强烈建议IX组可能是识别PrPSc特异性表位的抗体。识别 aa59-89 线性表位的 mAb、识别 aa143-151 的 mAb 和识别 aa1555-231 区域内的结构表位的 mAb 抑制朊病毒感染细胞中的 PrPSc 合成。由于这些抗体与细胞膜上表达的PrPC强烈反应，因此正常的PrPC代谢途径受到抗体与细胞膜上PrPC的结合的影响，从而减少了作为PrPSc合成的底物的PrPC的供应。是抑制的结果。

项目成果

池田徹也: "牛海綿状脳症に関する検査概要と今後の対応"食品衛生研究. 52・1. 33-42 (2001)

池田哲也：“牛海绵状脑病的检查概要和未来措施”食品卫生研究52・1（2001）。

堀内 基広: "動物のプリオン病"ウイスル. 51. 145-150 (2001)

Motohiro Horiuchi：“动物朊病毒病”病毒。 51. 145-150 (2001)

品川森一: "プリオン病の免疫学的検出法"生活衛生. 45・5. 259-269 (2001)

品川森一：“朊病毒疾病的免疫学检测方法”生活卫生45・5。