プリオンの増殖を規定する正常型-異常型プリオン蛋白質の分子間相互作用に関する研究

调节朊病毒增殖的正常和异常朊病毒蛋白之间的分子间相互作用研究

基本信息

批准号：
13226004
负责人：
堀内基広
金额：
--
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

病原性プリオン蛋白質(PrPSc)と正常型プリオン蛋白質(PrPC)が直接会合することが、PrPScの増殖の第一段階である。そこで、PrPCとPrPScの結合に関与するPrP分子上のドメインを調べることを目的として、各種PrP合成ペプチドがPrPC-PrPSc間の相互作用を阻害するか否かについて検討した。PrPCがPrPSc存在下でPrPSc様のProteinase K(PK)抵抗性分子(PrP-res)に転換する試験管内転換反応で、PrP合成ペプチドaa117-141、aa166-179、aa200-223はPrPCがPrP-resに転換するのを阻害した。これらのPrPペプチドはPrPCと結合することにより、PrPCとPrPScの結合を阻害することが判明した。結合阻害活性を示すPrPペプチドは反応条件下ではβシート構造をとる傾向があることから、PrPペプチドがPrPScのPrPCへの結合ドメインを模倣することでPrPCと結合し、PrPC上のPrPSc結合ドメインを占拠する結果、PrPCとPrPScの結合を阻害する可能性が示唆された。PrPCとPrPScの分子間相互作用を解析する道具として、PrP分子に対するモノクローナル抗体(mAb)パネルを作製した。計34のmAbは認識するエピトープから9群に分類された。グループI〜VIはPrP分子上のリニアエピトープを認識する抗体、グル-プVII、VIIIはPrP分子上の構造エピトープを認識する抗体であった。また、グループIXはPrPSc特異的エピトープを認識する抗体である可能性が強く示唆された。aa59-89のリニアエピトープを認識するmAb、aa143-151を認識するmAb、およびaa1555-231領域内の構造エピトープを認識するmAbはプリオン感染細胞におけるPrPScの合成を阻害した。これらの抗体は細胞膜上に発現するPrPCと強く反応することから、抗体が細胞膜上のPrPCと結合することで正常なPrPC代謝経路が影響を受けるために、PrPSc合成の基質となるPrPCの供給が阻害された結果であると考えられる。

致病性prion蛋白（PRPSC）与正常prion蛋白（PRPC）的直接关联是PRPSC增殖的第一步。因此，为了研究与PRPC和PRPSC结合的PRP分子的结构域，我们研究了各种PRP合成肽是否抑制PRPC与PRPSC之间的相互作用。在测试体外转移反应中，在PRPSC存在下，PRPC转化为PRPSC样蛋白酶K（PK）抗性分子（PRP-RES），PRP合成肽AA117-141，AA1666-179，AA1666-179，AA166-179和AA200-223抑制了PRPC的转换PRPC-PRP-rpc-res rpc-res rpc-res res res res。发现这些PRP肽通过与PRPC结合来抑制PRPC和PRPSC的结合。由于表现出结合抑制活性的PRP肽倾向于在反应条件下采用β-折叠结构，因此建议PRP肽通过模仿PRPSC与PRPC的结合结构域与PRPC结合，并在PRPC上占据PRPSC结合域，这可能会抑制PRPC和PRPC的结合。制备了与PRP分子的单克隆抗体（MAB）面板作为分析PRPC和PRPSC之间分子间相互作用的工具。基于他们识别的表位，总共将34个单克隆变量分为9组。 I-VI组是识别PRP分子线性表位的抗体，而VII和VIII组是识别PRP分子上结构表位的抗体。还强烈建议IX组可能是识别PRPSC特异性表位的抗体。识别AA59-89的线性表位，识别AA143-151的MAB和MABS的mABS，识别AA1555-231区域内的结构表位的mABS抑制了prion感染的细胞中PRPSC的合成。由于这些抗体与在细胞膜上表达的PRPC强烈反应，因此人们认为，抗体与细胞膜上PRPC的结合会影响正常的PRPC代谢途径，这抑制了PRPC的供应，这是PRPSC CyntheSease的底物。