伝達性海綿状脳症関連蛋白質PrPによる神経細胞死の分子機構に関する研究

传染性海绵状脑病相关蛋白PrP致神经细胞死亡的分子机制研究

基本信息

批准号：
07760272
负责人：
堀内基広
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760272/
关键词：
伝達性海綿状脳症スクレイピ-神経細胞死

项目摘要

本研究は伝達性海綿状脳症における神経細胞死と本病関連蛋白質(PrP)の関係を分子レベルで解明することを目的として開始した。これまでにマウス神経芽腫細胞(N2a)、およびラット副腎クロム親和性細胞腫(PC12)に羊PrPC(PrPCは正常型PrPを示す)を過発現させることに成功しているので、これら培養細胞を用いて研究を行った。羊PrPC過発現細胞は内在性PrPCに比べ数十倍羊PrPCを発現している。羊PrPCの過発現自体が細胞に及ぼす影響を調べたが、NGF、cAMPの刺激に対する応答などの生物性状にコントロールとなる正常細胞との間に差は認められなかった。また、羊PrPCの過発現自体が細胞の活性に影響するか否かをLDH遊離試験、Ho33258核染色により調べたが、正常細胞との間に差は認められなかった。クロロキン処理により羊PrPCの蓄積を高めた場合でも顕著な差は認められなかった。神経細胞毒性が報告されているマウスPrPコドン106-129の合成ペプチドに相応する羊PrP合成ペプチドを羊PrPC過発現細胞に添加し本ペプチドの細胞致死活性を調べたが、羊PrP合成ペプチドによる羊PrPC過発現細胞の選択的な細胞死は観察されなかった。現在まで、PrPによる神経細胞毒性が観察されたのはマウスおよびラットの初代神経培養細胞に限られており、株化細胞での例はない。本研究においても神経系株化細胞でPrPによる細胞死を誘導することは出来なかった。また、トランスジェニックマウスを用いた研究からPrPCと同宿主のカウンターパートが伝達性海綿状脳症の病理発生に関与することが示唆されている。本研究から、伝達性海綿状脳症における神経細胞死の分子機構の解明には、in vitroで神経細胞死を誘導可能な細胞系の選択および、用いる細胞と同宿主のPrPCに探索子となるエピトープタグを付加したマーカー分子を使用した解析系が必要であることが示唆された。

本研究的目的是在分子水平上阐明传染性海绵状脑病中神经元死亡与疾病相关蛋白（PrP）之间的关系。到目前为止，我们已经成功在小鼠神经母细胞瘤细胞（N2a）和大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）中过表达羊PrPC（PrPC表示正常PrP）；过表达羊 PrPC 的细胞表达的羊 PrPC 是内源性 PrPC 的几十倍。我们研究了羊 PrPC 过度表达对细胞的影响，但与正常对照细胞相比，在生物学特性（例如对 NGF 和 cAMP 刺激的反应）方面没有观察到差异。此外，我们通过LDH释放试验和Ho33258核染色研究了羊PrPC本身的过度表达是否影响细胞活性，但与正常细胞没有观察到差异。即使氯喹处理增加了绵羊 PrPC 的积累，也没有观察到显着差异。将与小鼠 PrP 密码子 106-129 的合成肽相对应的羊 PrP 合成肽（据报道具有神经毒性）添加到过表达羊 PrPC 的细胞中，以检查该肽的细胞杀伤活性，无 PrPC 选择性细胞死亡。 -观察到过度表达的细胞。迄今为止，仅在原代培养的小鼠和大鼠神经元细胞中观察到 PrP 诱导的神经元细胞毒性，并且在已建立的细胞系中还没有这样的例子。在这项研究中，我们也无法通过 PrP 在神经系统细胞系中诱导细胞死亡。此外，使用转基因小鼠的研究表明，PrPC 及其宿主对应物参与了传染性海绵状脑病的发病机制。从本研究中，为了阐明传染性海绵状脑病神经元细胞死亡的分子机制，我们需要选择能够在体外诱导神经元细胞死亡的细胞系，并鉴定在同一宿主的PrPC中作为探针的表位有人建议使用标记分子的分析系统是必要的。