伝達性海綿状脳症関連蛋白質PrPによる神経細胞死の分子機構に関する研究

传染性海绵状脑病相关蛋白PrP致神经细胞死亡的分子机制研究

• 批准号: 07760272
• 负责人: 堀内 基広
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760272/
• 关键词: 伝達性海綿状脳症; スクレイピ-; 神経細胞死

本研究は伝達性海綿状脳症における神経細胞死と本病関連蛋白質(PrP)の関係を分子レベルで解明することを目的として開始した。これまでにマウス神経芽腫細胞(N2a)、およびラット副腎クロム親和性細胞腫(PC12)に羊PrPC(PrPCは正常型PrPを示す)を過発現させることに成功しているので、これら培養細胞を用いて研究を行った。羊PrPC過発現細胞は内在性PrPCに比べ数十倍羊PrPCを発現している。羊PrPCの過発現自体が細胞に及ぼす影響を調べたが、NGF、cAMPの刺激に対する応答などの生物性状にコントロールとなる正常細胞との間に差は認められなかった。また、羊PrPCの過発現自体が細胞の活性に影響するか否かをLDH遊離試験、Ho33258核染色により調べたが、正常細胞との間に差は認められなかった。クロロキン処理により羊PrPCの蓄積を高めた場合でも顕著な差は認められなかった。神経細胞毒性が報告されているマウスPrPコドン106-129の合成ペプチドに相応する羊PrP合成ペプチドを羊PrPC過発現細胞に添加し本ペプチドの細胞致死活性を調べたが、羊PrP合成ペプチドによる羊PrPC過発現細胞の選択的な細胞死は観察されなかった。現在まで、PrPによる神経細胞毒性が観察されたのはマウスおよびラットの初代神経培養細胞に限られており、株化細胞での例はない。本研究においても神経系株化細胞でPrPによる細胞死を誘導することは出来なかった。また、トランスジェニックマウスを用いた研究からPrPCと同宿主のカウンターパートが伝達性海綿状脳症の病理発生に関与することが示唆されている。本研究から、伝達性海綿状脳症における神経細胞死の分子機構の解明には、in vitroで神経細胞死を誘導可能な細胞系の選択および、用いる細胞と同宿主のPrPCに探索子となるエピトープタグを付加したマーカー分子を使用した解析系が必要であることが示唆された。

这项研究的启动是为了阐明神经元细胞死亡与疾病相关蛋白（PRP）在分子水平的可透射海绵状脑病中的关系。到目前为止，我们已经成功表达了小鼠神经母细胞瘤细胞（N2A）和大鼠肾上腺染色体细胞瘤（PC12）中的绵羊PRPC（PRPC显示正常的PRP）（PC12），并使用这些培养的​​细胞进行了研究。绵羊PRPC过表达的细胞比内源性PRPC多几十倍绵羊PRPC。我们研究了绵羊PRPC过度表达对细胞的过表达的影响，但是在控制生物学特性（例如对NGF和CAMP刺激的反应）的正常细胞之间没有发现差异。此外，通过LDH释放测试和HO33258的核染色检查了绵羊PRPC过表达本身是否会影响细胞活性，但在两个细胞和正常细胞之间未发现差异。即使氯喹处理增加了绵羊PRPC的积累，也没有观察到显着差异。据报道，一种与小鼠PRP密码子106-129的合成肽相对应的绵羊PRP合成肽，据报道是神经细胞毒性的，被添加到绵羊PRPC过表达细胞中以研究这种肽的致命活性，但没有Sheep Prpc过表达的细胞的选择性细胞死亡，这是由Sheep过表达的细胞观察到的。迄今为止，仅在小鼠和大鼠的原发性神经元培养物中观察到由于PRP引起的神经细胞毒性，并且没有细胞系的例子。在这项研究中，不可能诱导神经系统细胞中PRP引起的细胞死亡。此外，使用转基因小鼠的研究表明，PRPC和宿主的对应物参与转基因海绵状脑病的发病机理。这项研究表明，为了阐明可传播的海绵状脑病中神经元死亡的分子机制，有必要选择可以在体外诱导神经元死亡的细胞系，并使用标记分子使用具有表位标记的标记分子作为搜索器作为prpcs a prpcs a prpcs ot ant Ans of and and of and and the hord所使用的分析系统。