アクチン関連蛋白質カルポニン等を分子標的とした癌の腹膜播種の検討

使用肌动蛋白相关蛋白（例如钙调蛋白）作为分子靶标检查癌症的腹膜传播

基本信息

批准号：
13218055
负责人：
谷口俊一郎
金额：
$ 4.35万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Calponin h1(CN)は通常平滑筋に強く発現するactin結合蛋白質で、細胞の増殖、運動、接着性を調節することが知られている。カルポニン欠失(CN^<-/->)マウスの血管と腹壁は野生型(CN^<+/+>)マウスに比べ脆弱であり、(CN^<-/->)マウスの腹膜にB16F10 melanomaをi.p接種したところ腹膜播種が顕著であることを報告した。13年度研究の目的は腹膜中皮細胞のCN低下による癌細胞浸潤の増強をin vitro実験において示すこと、またCN^<-/->マウスの中皮細胞にCN遺伝子を導入し、癌細胞が浸潤できるか否か調べ、腹膜播種の遺伝子治療の可能性を検討することであった。得られた成果 1)CN発現がヒト悪性腫瘍部の血管で減少していること、CN^<-/->マウスの血管および腹膜が脆弱であること、CN^<-/->マウスにおいてB16-F10(F10)による血行性転移および腹膜播種が亢進していることを報告した(Cancer Res,2001)。2)CN^<+/+>及びCN^<-/->マウスの腸間膜から中皮細胞を培養しそこへF10を重層してその浸潤能を観察した。その結果、CN^<+/+>に比べCN^<-/->中皮細胞への癌細胞浸潤が亢進していた。またCN^<+/+>中皮細胞においてF10の浸潤に先立ってCN蛋白質の発現低下が抗CN抗体による免疫染色で観察された。以上から、CNは中皮細胞間の接着性を正に制御し、癌の浸潤を抑制することが示唆された。3)CN遺伝子を導入したadenovirus vector(CN-GFP Ad)を構築し、CN^<-/->マウス培養中皮細胞に感染させた。そこへF10を重層したところ、重層培養後6hr経過してもF10の中皮細胞層への浸潤が認められなかった。4)CN-GFP Adをi.p接種したところ、CN^<-/->マウスの腸管膜表面の中皮細胞への導入を確認し、腸管の癒着等副作用はみられないことが分った。

Calponin H1（CN）是一种肌动蛋白结合蛋白，通常在平滑肌中强烈表达，并已知可以调节细胞增殖，运动和粘附。钙蛋白缺乏剂（CN^< - / - >）小鼠的血管和腹壁比野生型（CN^<+/+>）小鼠更脆弱，据报道，当B16F10黑色素瘤将B16F10黑色素瘤接种到（cn^<-/ - / - >）小鼠中时，腹膜播种是突出的。 2013年研究的目的是证明由于腹膜间皮细胞中CN的降低而增加了癌细胞浸润，并研究是否可以将CN基因引入CN^<-/>小鼠的间皮细胞，并研究基因治疗腹膜腹膜的可能性。获得的结果：1）我们报道说，人类恶性肿瘤中血管中的CN表达降低，CN^< - / - >小鼠中的血管和腹膜较弱，而B16-F10（F10）的血源转移和腹膜传播（F10）在Cn^< - / - > MICE中得到增强。 2）从Cn^<+/+>和Cn^< - / - >小鼠的肠系膜膜中培养间皮细胞，然后将F10分层以观察其侵入性能力。结果，与CN^<+/+>相比，癌细胞侵袭Cn^< - / - >间皮细胞增加。此外，通过用抗CN抗体进行免疫染色，在侵袭F10之前，在CN^<+/+>间皮细胞中观察到CN蛋白表达的降低。从以上，建议CN积极调节间皮细胞之间的粘附并抑制癌症的侵袭。 3）转移CN基因的腺病毒载体（CN-GFP AD）被构造并用培养的CN^< - / - >小鼠间皮细胞感染。当F10分层时，即使在重叠培养后6小时后，也没有观察到间皮细胞层的浸润。 4）当CN-GFP AD接种I.P时，已确认它被引入Cn^< - / - >小鼠肠膜表面上的间皮细胞中，并且发现没有观察到诸如肠粘附的副作用。