癌の悪性度、特に転移能に関与する遺伝子の検索・同定とその生物学的機能解析

癌症恶性尤其是转移潜能相关基因的搜索和鉴定及其生物学功能分析

基本信息

批准号：
01015078
负责人：
谷口俊一郎
金额：
$ 4.42万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ラット形質3Y1細胞に、yーfosを導入すると肺転移能が増強することを示してきた。転移能増強の要因を細胞生物学的に解析した結果、受容細胞がsre形質転換細胞の場合は運転能昂進を伴う浸潤能の増強等が一要因であると示唆される結果を得た。更に運動能の増費に伴うアクチン関連蛋白質(低分子型トロポミオシン等)の発現変化、lysosomal enzymeの一つであるプロカテプシンLの発現及び分泌の増強等を観察した。又、fos導入による高転移性獲得細胞のcDNAライブラリーを作製し受容細胞よりも発現が増強している数個のcDNAクローンを得た。それらは従来報告のないものを含みlysosomeに存在する蛋白質やtranslationに関与するelorgation factor 1等に対応するものであった。(2)マウスB16黒色腫で発見した新種アクチン(A^xをbetamと改名)が転移能抑制的に働くことを、cDNA導入実験で示し、この際、他アクチン関連蛋白質(低分子型tropomyosinやvinculin)の同時発現変化を観察した。また、betamに対する特異抗体を作製し、betamcDNAに対応するアクチンタンパク質が細胞内に存在し、細胞内アクチンフィラメントに取り込まれていることを確認した。アクチンの種類はbetamと異なるが(平滑筋型alphaアクチン)、やはり悪性化に伴う第3アクチンの発現変化をヒト色素組織及びラット3Y1細胞で観察した。3Y1細胞に於いては抗alphaアクチン抗体で染色するとalphaアクチンがアクチンフィラメントに取り込まれていることそしてalphaアクチンcDNAを導入発現させることによってアクチンフィラメントの回復および浸潤能の減少を観察した。以上の如く、異なった細胞系で、細胞の形態変化や運動性に関与する細胞骨格蛋白質の遺伝子が転移能関連遺伝子として示唆された。これらの蛋白質あるいは遺伝子の機能及び発現制御の解明が今後の課題である。

(1) 我们已经证明，将 y-fos 引入大鼠血浆 3Y1 细胞可增强其肺转移潜力。作为对促进转移能力增强的因素进行细胞生物学分析的结果，我们获得的结果表明，当受体细胞是SRE转化细胞时，因素之一是伴随着驱动能力增强的侵袭能力增强。此外，我们观察到随着运动的增加，肌动蛋白相关蛋白（如低分子量原肌球蛋白）的表达发生变化，组织蛋白酶L（一种溶酶体酶）的表达和分泌增强。此外，我们还建立了导入fos的高度转移细胞的cDNA文库，并获得了多个表达高于受体细胞的cDNA克隆。这些包括溶酶体中存在的蛋白质和参与翻译的伸长因子 1，包括那些以前未报道过的蛋白质。 (2)我们通过cDNA导入实验证明，在小鼠B16黑色素瘤中发现的一种新型肌动蛋白（A^x更名为betam）抑制了其转移潜力，我们观察到了vinculin同时表达的变化。此外，我们还制备了针对 betam 的特异性抗体，并证实与 betam cDNA 相对应的肌动蛋白蛋白存在于细胞内，并掺入细胞内肌动蛋白丝中。尽管肌动蛋白的类型与 betam（平滑肌 α 肌动蛋白）不同，但在人类色素组织和大鼠 3Y1 细胞中观察到与恶性肿瘤相关的三级肌动蛋白表达的变化。在3Y1细胞中，当用抗α-肌动蛋白抗体染色时，发现α-肌动蛋白掺入肌动蛋白丝中，并且通过导入和表达α-肌动蛋白cDNA观察到肌动蛋白丝的恢复和侵袭能力的降低。如上所述，参与细胞形态变化和运动的细胞骨架蛋白基因被认为是不同细胞系中的转移潜能相关基因。阐明这些蛋白质或基因的功能和表达控制是未来的挑战。