癌の悪性度、特に転移能に関与する遺伝子の検索・同定とその生物学的機能解析

癌症恶性尤其是转移潜能相关基因的搜索和鉴定及其生物学功能分析

基本信息

批准号：
63015065
负责人：
谷口俊一郎
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63015065/
关键词：
B16黒色腫アクチン転移浸潤細胞骨格 v-fos癌遺伝子 3y1細胞 NK感受性

项目摘要

(1)マウスB16黒色腫に発現する新種アクチン(A^x)の研究(a)マウスB16黒色腫において、その転移能及び浸潤能の増加、細胞骨格構築低下に伴って発現低下するA^xのcDNAクローニングを行い、その構造を決定した。A^xは従来知られているβ-アクチン(β)に極めて類似しており、28番目のアミノ酸がβにおいてアルギニンである一方、A^xではロイシンであった。尚、3'、5'非翻訳領域において、塩基置換、挿入、欠失がβに比べて6ヵ所ありA^xはβに類似しているものの、独立の遺伝子にコードされていることが示唆された。(b)クローン化したA^xcDNAを適当なプロモーターにつなぎ、A^xを発現せず高転移性のB16-F10細胞に導入し、A^xを発現させた。その結果、細胞骨格の回復、in vitroの浸潤能低下、C57BL/6マウスにおける肺転移能の低下が観察された。この結果は、A^xがB16黒色腫において、転移抑制的に働くことを示唆している。(2)ヒト良性色素組織におけるアクチン発現(a)ヒト良性色素組織には、β-、γ-アクチン以外に第3のアクチンが検出され、悪性黒色腫ではその検出頻度が低下することを観察してきたが、その第3アクチンが、Western及びNorthern blot解析の結果、平滑筋型α-アクチンであることが分かった。(3)ラット形質転換 3vl細胞への v-fos導入による、転移能増強のメカニズム。(a)src及びrasで形質転換した3Y1細胞にv-fosを導入し、肺転移能増強を観察してきたが、前者においては、浸潤能及び運動性の増強が、後者においては、NKに対する感受性低下が転移能増強の主要因と考えられた。尚、srcに、v-fosを導入した細胞において、運動性の変化に対応するアクチン関連分子の発現変化が観察された。

(1)小鼠B16黑色素瘤中表达的新型肌动蛋白(A^x)的研究 (a)在小鼠B16黑色素瘤中，A^x表达随着转移和侵袭能力的增加以及细胞骨架结构的减少而减少。我们进行了cDNA克隆并确定。它的结构。 A^x与之前已知的β-肌动蛋白（β）非常相似，β中的第28个氨基酸是精氨酸，而A^x中的第28个氨基酸是亮氨酸。此外，在3'和5'非翻译区，与β相比，有6个碱基替换、插入和缺失，这表明A^x虽然与β相似，但它是由独立基因编码完成的。 (b)将克隆的A^x cDNA连接至适当的启动子并引入不表达A^x且高度转移的B16-F10细胞中以表达A^x。结果，观察到C57BL/6小鼠的细胞骨架恢复、体外侵袭能力下降和肺转移能力下降。该结果表明 A^x 具有抑制 B16 黑色素瘤转移的作用。 (2)肌动蛋白在人类良性色素组织中的表达(a)除了β-和γ-肌动蛋白之外，在人类良性色素组织中还检测到第三种肌动蛋白，并且我们观察到其在恶性黑色素瘤中的检测频率降低。 Western和Northern印迹分析的结果，发现第三个肌动蛋白是平滑肌型α-肌动蛋白。 (3)通过将v-fos引入大鼠转化的3vl细胞增强转移潜能的机制。 (a)我们将v-fos引入到用src和ras转化的3Y1细胞中，并观察到肺转移能力的增强，这被认为是转移潜力增强的主要因素。另外，在src中导入了v-fos的细胞中，观察到与运动变化相对应的肌动蛋白相关分子的表达变化。