癌の悪性度、特に転移能に関与する遺伝子の検索・同定とその生物学的機能解析

癌症恶性尤其是转移潜能相关基因的搜索和鉴定及其生物学功能分析

基本信息

批准号：
03152095
负责人：
谷口俊一郎
金额：
$ 4.03万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152095/
关键词：
転移転移抑制 βmアクチンビンキュリン細胞運動能 vーfos癌遺伝子

项目摘要

マウスB16黒色腫において転移抑制的に働くアクチン(βm)のcDNAを高浸潤性B16ーBL6に導入しても、B16ーF10に導入した時と同様に、細胞骨格構築の回復及び転移能の低下を観察した。又、BLー6細胞において外来性のβmアクチンの発現量に依存した運動能低下がみられた。βmアクチン蛋白質の生化学的性質を調べた結果、ミオシンATPaseの活性化は、低Mg^<++>濃度領域でβmを含むアクチン分画がβmを含まない分画よりも強く、DNase1の阻害効果は、通常の脱重合条件下でβmアクチンを含む分画の方が弱い活性を示すことが分かった。又、通常の脱重合条件下でβmを含むアクチンをβm特異的抗体とprotein Aで沈降させてみると、βmとβ、γがともに沈澱として生じた。これらの結果はβmを含む分画はアクチン繊維を低イオン強度下でも形成し易く、脱重合しにくいことを示唆したいる。これらの生化学的性質から、βmが細胞内で発現すると細胞の動きに対して不利なアクチン繊維が形成されると推定された。膜の裏打ち蛋白質ビンキュリンのβmアクチンに伴って発現変化を観察した。これは、mRNAレベルの変化であることが分かった。vーfos導入による高転移性ラット3Y1細胞において発現が増強している遺伝子のcDNAクロ-ンを数個得たが、そのうち未知のものの構造が明らかになった。それは、リボソ-ム蛋白をコ-ドしており、酵母のYL41というものに相補性を有するものであった。又、Elongation Factor1α(EF1α)の全蛋白質領域をコ-ドするcDNAを得たが、これは蛋白合成制御に関与するGTP結合蛋白であり最近アクチン結合蛋白質ということも分かった。ラットのアミノ酸配列中にはそれらの機能領域に対応する部位が保存されている事が分かった。

即使将抑制小鼠 B16 黑色素瘤转移的肌动蛋白（βm）的 cDNA 导入高侵袭性的 B16-BL6 中，细胞骨架结构也会恢复，转移能力也会降低，与导入 B16-F10 中的情况类似。观察到。此外，在 BL-6 细胞中观察到运动性下降，这取决于外源 βm 肌动蛋白的表达水平。研究βm肌动蛋白的生化特性，结果发现，在低Mg^++浓度范围内，含有βm的肌动蛋白级分比不含βm的肌动蛋白级分更强地激活肌球蛋白ATP酶，并且抑制DNase1发现含有βm肌动蛋白的级分在正常解聚条件下表现出较弱的活性。此外，当使用βm特异性抗体和蛋白A在正常解聚条件下沉淀含有βm的肌动蛋白时，βm、β和γ均作为沉淀物形成。这些结果表明，即使在低离子强度下，含有βm的级分也容易形成肌动蛋白纤维并且难以解聚。根据这些生化特性，推测当βm在细胞中表达时，会形成不利于细胞运动的肌动蛋白纤维。我们观察到膜衬蛋白纽蛋白与 βm-肌动蛋白的表达变化。发现这是 mRNA 水平的变化。我们获得了几个基因的 cDNA 克隆，这些基因在导入 v-fos 的高转移性大鼠 3Y1 细胞中表达增强，其中一个未知基因的结构被揭示。它编码核糖体蛋白，与酵母 YL41 互补。我们还获得了编码延伸因子1α（EF1α）整个蛋白区域的cDNA，EF1α是一种参与蛋白质合成调节的GTP结合蛋白，最近被发现是一种肌动蛋白结合蛋白。发现对应于这些功能区的位点在大鼠氨基酸序列中是保守的。