比較ゲノム的アプローチを用いた真核生物ヘリカーゼ様遺伝子群の体系的機能解析

使用比较基因组方法对真核解旋酶样基因进行系统功能分析

基本信息

批准号：
13206082
负责人：
浴俊彦
金额：
$ 2.88万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物におけるヘリカーゼ様タンパク質ファミリーの機能を網羅的に解明する目的で、単細胞生物としては出芽酵母を、多細胞生物としては線虫を、各々モデルとして機能解析研究を進めた。まず出芽酵母の解析については、以下のような研究成果を挙げた。1.機能未知の10個の非必須ヘリカーゼ様遺伝子について、遺伝子破壊株の表現型の解析を進め、3個のミトコンドリア機能に関与すると思われる遺伝子(YDR332W,YGL064C,YOL095C)を新たに同定した。2.組換えに関与することが示唆されているYnl218wpについて、相互作用する酵母蛋白質を同定するためのタグ融合蛋白質の発現株を作成した。Ynl218wpについては、これまでに酵母two-hybrid法により同定した複数の蛋白質との相互作用についても、詳細な解析を進めた。また線虫については、ゲノムに存在するほぼ全てのヘリカーゼ様遺伝子について網羅的なRNAi解析を進め、次に示す成果を挙げた。1.現時点(2002年2月)までの段階で、125個のヘリカーゼ様遺伝子のRNAi解析を完了した。その結果、テストした遺伝子の約40%のRNAi変異体において、細胞増殖や初期発生、個体成長、あるいは形態形成に明らかな欠損が認められた。2.RNAiを利用した機能遺伝子のスクリーニング系を確立した。具体的に、紫外線やX線の照射に感受性を示すようなRNAi変異体のスクリーニングを進めた。その結果、新たに複数の候補遺伝子が同定され、RNAiを用いた機能遺伝子の有効性を実証することができた。

为了全面阐明解旋酶样蛋白家族在真核生物中的功能，我们以酿酒酵母作为单细胞生物、秀丽隐杆线虫作为多细胞生物进行功能分析研究。首先，针对酿酒酵母的分析，取得了以下研究成果。 1. 我们分析了10个功能未知的非必需解旋酶样基因的基因破坏菌株的表型，并鉴定了三个被认为与线粒体功能有关的新基因（YDR332W、YGL064C、YOL095C）。 2.对于被认为参与重组的Ynl218wp，我们创建了标签融合蛋白表达菌株来鉴定相互作用的酵母蛋白。关于Ynl218wp，我们还对其与先前使用酵母二杂交方法鉴定的多种蛋白质的相互作用进行了详细分析。对于秀丽隐杆线虫，我们对基因组中几乎所有解旋酶样基因进行了全面的RNAi分析，并取得了以下结果。 1. 迄今为止（2002年2月），我们已经完成了125个解旋酶样基因的RNAi分析。结果，大约 40% 的测试基因的 RNAi 突变体在细胞增殖、早期发育、个体生长或形态发生方面表现出明显的缺陷。 2.我们建立了利用RNAi的功能基因筛选系统。具体来说，他们筛选了对紫外线和 X 射线照射敏感的 RNAi 突变体。结果，鉴定了多个新的候选基因，并证明了使用RNAi的功能基因的有效性。