カルシウム透過性チャネルを標的とした血管平滑筋増殖制御法の確立

建立针对钙渗透通道控制血管平滑肌增殖的方法

基本信息

批准号：
12032203
负责人：
小島至
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)GRC-1の発現に関する研究GRC-1はIGF-Iにより調節されるCa^<2+>透過性チャネルであるが、非刺激時には主に細胞内プールに存在するが、刺激を受けるとPI-3キナーゼ依存的な機構により細胞膜上にトランスローケーションするという特徴がある。培養血管平滑筋細胞での発現を検討した結果、収縮型の平滑筋では発現は少ないが、増殖型に形質変換するとその発現が大きく増加することが明らかになった。また増殖型の平滑筋細胞にアンチセンスGRC-1を導入してその蛋白発現をほぼ消失させた場合にも、約50%程度のCa^<2+>透過性チャネル電流が残存した。この結果から増殖型平滑筋細胞ではGRC-1がCa^<2+>透過性チャネル電流の約50%を占めていると推定された。2)GRC-1以外のCa^<2+>透過性チャネルアンチセンス法によりGRC-1の発現を抑制してもCa^<2+>透過性チャネル電流が存在することからGRC-1以外のチャネルの存在が推定される。そこで他のCa^<2+>透過性チャネル分子を検索した結果、新たにGRC-2,および3と名付けた新規の遺伝子を同定した。これらをCHO細胞に発現したところ、Ca^<2+>透過性のある非選択性陽イオンチャネル活性が認められた。またそのCa^<2+>電流はIGF-Iの投与により数倍に増加したことから、これらが新規のIGF-Iにより活性化されるCa^<2+>透過性チャネル分子をコードする遺伝子であることが判明した。

1）关于GRC-1 GRC-1表达的研究是由IGF-I调节的CA^<2+>可渗透通道，但在不刺激时，主要存在于细胞内池中，但在刺激时通过PI-3激酶依赖性机制在细胞膜上易位。培养的血管平滑肌细胞中的表达表明，尽管收缩平滑肌的表达较小，但在转化为增殖形式时，它显着增加。此外，当将反义grc-1引入增殖时，几乎完全消除了其蛋白质表达时，约有50％的Ca^<2+>可渗透通道电流保留。该结果表明，在增殖平滑肌细胞中，GRC-1约占CA^<2+>渗透通道电流的50％。 2）即使GRC-1的表达被Ca^<2+>可渗透的通道反义方法抑制，也存在Ca^<2+>可渗透通道电流的存在，并且可以估计GRC-1以外的通道的存在。因此，我们搜索了其他Ca^<2+>可渗透的通道分子，并鉴定了一个新的基因，新命名为GRC-2和3。当这些基因在CHO细胞中表达时，使用Ca^<2+>渗透性观察到了非选择性的阳离子通道活性。此外，由于Ca^<2+>电流通过IGF-I给药几次增加，因此发现这些是编码新型IGF-I激活的Ca^<2+>可渗透通道分子的基因。