骨髄細胞から膵β細胞を作る

从骨髓细胞产生胰腺β细胞

基本信息

批准号：
14657269
负责人：
小島至
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

糖尿病の再生医療を確立するためには、前駆細胞を効率よく分化させて、インスリンを分泌する膵β細胞を数多く作製する必要がある。このためにはどのような前駆細胞を用い、どのようにして数多くの膵β細胞を得るかということが重要である。われわれは骨髄細胞をこの目的に使えないか、さらに骨髄細胞の中でもin vitroで容易に増幅することが可能な骨髄間葉系幹細胞がこの目的に使えないかと考えて本研究を開始した。まず温度依存性にSV40T抗原を発現するトランスジェニックマウスの骨髄から間葉系細胞を得てこれを株化した。この細胞は32度で培養する際にはT抗原を発現し、その結果無限増殖が可能な状熊になる。一方、温渡を37度に変えるとT抗原は消失し、正常の間葉系細胞と同様の形質を発現するとともに、様々な条件で分化能を発揮する。この細胞GFP遺伝子導入によりマーキングし同系マウスに移植したが、無処置のマウスでは膵臓にGFP陽性細胞は出現しなかった。一方、マウスの膵管を結紮し、膵炎を惹起したマウネにマーキングした細胞を移植すると、やがて膵組織にGFP陽性細胞が集積した。その一部は転写因子PDX1や膵前駆細胞のマーカーであるPGP9.5を発現し、一部にインスリンをも発現する細胞が認められた。すなわちin vivoの条件でインスリン産生細胞へと分化しうることが明らかになった。しかし膵管結紮ではなく、膵部分切除を行ったマウスや、ストレプトゾトシンの投与により糖尿病状態にしたたマウスに移植した場合にはこのような分化転換は認めなかった。そこでin vivoの培養系に、膵管結紮を行ったマウス膵臓の抽出液を添加して培養を行ったところ、ごく一部ではあるが、インスリン産生細胞への分化が認められた。今後さらに効率よく分化させる条件を検討していきたい。

为了建立糖尿病再生医学，有必要有效区分祖细胞并产生许多分泌胰岛素的胰腺β细胞。为了实现这一目标，重要的是要知道使用哪种祖细胞以及如何获得许多胰腺β细胞。我们开始了这项研究，认为不能将骨髓细胞用于此目的，并且在骨髓细胞中，可以在体外容易扩增的骨髓间充质干细胞可用于此目的。首先，以温度依赖性方式从表达SV40T抗原的转基因小鼠的骨髓中获得间充质细胞，然后转化为菌株。当以32度培养时，这些细胞表达抗原，导致熊可以无限生长。另一方面，如果将浊度更改为37度，则T抗原消失，表达与正常间充质细胞相同的性状，并在各种条件下发挥分化能力。该细胞由GFP基因转移标记并将其移植到合烯型小鼠中，但是在未处理的小鼠的胰腺中没有GFP阳性细胞出现。同时，当植入了引起胰腺炎的小鼠的小鼠的胰管和标记的细胞时，GFP阳性细胞最终积聚在胰腺组织中。其中一些细胞表达了转录因子PDX1和PGP9.5，这是胰腺祖细胞的标记，其中一些也表达了胰岛素。换句话说，已经揭示了它可以在体内条件下分化为产生胰岛素的细胞。然而，当将这种转分化的人移植到经过部分胰腺切除而不是绑扎胰管的小鼠中，或者通过链蛋白酶施用糖尿病状态的小鼠。因此，将经历胰管结扎的小鼠胰腺提取物添加到体内培养系统中并进行培养，但将一小部分细胞分化为产生胰岛素的细胞。将来，我们想考虑进一步分化的条件。