好酸球分化の決定に関与する遺伝子の探索

寻找参与决定嗜酸性粒细胞分化的基因

基本信息

批准号：
11162219
负责人：
尾池雄一
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

血球分化に関与する遺伝子の探索を目的に遺伝子トラップ法を行い、CREB-binding protein(CBP)変異マウスを作製した。CBPは多くの転写因子のコアクチベーターとして転写制御機能に関与し、赤血球系転写因子GATA-1、EKLF、NF-E2、c-Myb、AML-1遺伝子と結合すること、EKLFやGATA-1自身をアセチル化しその転写活性を促進することが報告されており、造血における重要な機能が示唆されている。ホモ接合体は、1次造血障害及び血管網形成不全を示し胎生10.5日までに全例死亡した。卵黄嚢造血は前駆細胞レベルの障害(コロニー形成能は赤血球系細胞で対照の22%、顆粒球、マクロファージ系細胞で69%に低下)が示唆された。また、胎生致死のため、2次造血能及び血管網形成能をOP9細胞上での傍大動脈臓側中胚葉(P-Sp)器官培養法を用いて検討した。ホモ接合体由来P-Sp培養系では血管床形成、血管網形成とも全く認められず障害されていた。また、培養液中の浮遊血液細胞の赤血球系コロニー形成は完全に抑制され、顆粒球、マクロファージ系コロニー形成は20%に低下しており2次造血においてもCBPが関与していることが示唆された。しかし、VEGF165の投与によりin vitroでの血管床形成、血管網形成は軽度回復し、この培養液中の浮遊血球細胞を用いてのコロニーアッセイにおいて赤血球系コロニー形成は軽度回復した。このことは、造血における微小環境としての血管内皮の重要性を支持するものと考えた。以上よりCBPは1次及び2次造血において血球分化、特に赤血球系分化における前駆細胞の増殖、血管内皮細胞においては特に血管芽細胞の増殖・分化を制御していることを明らかにした。

为了寻找参与血细胞分化的基因，我们采用基因捕获法制备CREB结合蛋白（CBP）突变小鼠。 CBP 作为许多转录因子的共激活子参与转录控制功能，并与红系转录因子 GATA-1、EKLF、NF-E2、c-Myb 和 AML-1 基因结合，据报道其自身乙酰化；并促进其转录活性，表明其在造血中具有重要功能。纯合子表现出原发性造血障碍和血管网络缺陷，并且在胚胎第10.5天时全部死亡。卵黄囊造血功能被认为在祖细胞水平上受损（红系细胞的集落形成能力下降至对照的 22%，粒细胞和巨噬细胞下降至对照的 69%）。此外，由于胚胎致死性，使用OP9细胞上的主动脉旁内脏中胚层（P-Sp）器官培养物检查了继发性造血能力和血管网络形成能力。在纯合子来源的P-Sp培养系统中，根本没有观察到血管床形成和血管网络形成，表明它们受到损害。此外，培养基中漂浮血细胞的红系集落形成被完全抑制，粒细胞和巨噬细胞集落形成减少至20%，表明CBP也参与了次级造血作用。然而，施用VEGF165稍微恢复了体外血管床形成和血管网络形成，以及使用该培养基中的漂浮血细胞的集落测定中的红系集落形成。这被认为支持了血管内皮作为造血微环境的重要性。上述结果表明，CBP在初级和次级造血过程中调节血细胞分化，特别是红系分化过程中祖细胞的增殖，特别是血管内皮细胞中成血管细胞的增殖和分化。