リンパ管システムに関わる分子の網羅的スクリーニング

全面筛选淋巴系统相关分子

基本信息

批准号：
15659230
负责人：
尾池雄一
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

(目的)リンパ管内皮細胞よりリンパ管の発生、新生に重要な分子を網羅的に単離同定しその後、リンパ管新生の分子基盤を明らかにする。(方法)(1)マウスリンパ管腫モデルを作製し、そのリンパ管内皮細胞をラットの腹腔内に注入し細胞の表面抗原に対する抗体を網羅的に作製する。(2)リンパ管内皮細胞に特異的に発現しているLYVE-1に着目し、マウスLYVE-1に対するモノクローナル抗体を作製しリンパ管内皮細胞を単離・純化し、血管内皮細胞と発現している分子、機能などの点を比較検討する。(結果)(1)マウスリンパ管腫細胞をラットの腹腔内に注入し細胞の表面抗原に対する抗体作成の過程でXXXクローンのハイブリドーマをELISA及び免疫染色でスクリーニングした結果YYクローンのリンパ管腫由来リンパ管内皮細胞を特異的に認識する抗体が得られた。その後、様々な方法でこの抗体の認識する分子を同定する試みをしたが、結果的には不成功に終わった。(2)マウスLYVE-1に対するモノクローナル抗体を3クローン樹立することに成功した。3クローン間に差はなく、免疫組織染色、FACS解析においてリンパ管内皮細胞を認識できる抗体であることを確認した。現在までにリンパ管内皮に特異的と報告されている分子(SLC、Podoplanin、prox1)は、その報告通りであったが、血管内皮細胞で発現が報告されている分子に関しては弱くリンパ管内皮細胞に発現する分子群(CD44、TIE2、Flt1)と同等に発現する分子群(CD31、TIE1、Flk1)に分かれることを見出した。(考察)LYVE-1に対するモノクローナル抗体の樹立に成功し、リンパ管の同定、純化、単離が可能になったことは、これまでの多くのtoolを海外に頼ってきた国内のリンパ管研究者には朗報であると考える。今後、この抗体を用いて網羅的な解析手法を用いて血管内皮細胞と比較しつつリンパ管内皮細胞を明らかにしていきたいと考えている。

（目的）从淋巴内皮细胞中全面分离鉴定对淋巴管发育和新生重要的分子，进而阐明淋巴管生成的分子基础。 (方法) (1)制作小鼠淋巴管瘤模型，将淋巴管内皮细胞注射至大鼠腹腔内，综合产生针对细胞表面抗原的抗体。 (2)针对淋巴内皮细胞特异性表达的LYVE-1，我们制备了针对小鼠LYVE-1的单克隆抗体，分离纯化了淋巴内皮细胞，并对其在血管内皮细胞中的表达进行了分子和功能的比较研究。这些分子。（结果）（1）将小鼠淋巴管瘤细胞注射到大鼠腹腔内，在产生针对细胞表面抗原的抗体的过程中，通过ELISA和免疫染色筛选出XXX克隆淋巴管瘤来源的淋巴特异性抗体。获得识别导管内皮细胞。随后，人们进行了各种尝试来鉴定该抗体识别的分子，但所有努力均未成功。 (2)成功建立了3个抗小鼠LYVE-1单克隆抗体克隆。三个克隆之间没有差异，免疫组织学染色和FACS分析证实该抗体能够识别淋巴管内皮细胞。迄今为止报道的对淋巴管内皮细胞具有特异性的分子（SLC、Podoplanin、prox1）如报道的那样，但据报道在血管内皮细胞中表达的分子在淋巴管内皮细胞中表达较弱。以相同方式表达的（CD44、TIE2、Flt1）和同等表达的（CD31、TIE1、Flk1）。（讨论）LYVE-1单克隆抗体的成功建立，以及对淋巴管的识别、纯化和分离能力，对于国内淋巴管研究人员来说是一个重大成就，他们依赖了很多国外的工具，我认为这是很好的。消息。未来，我们希望利用该抗体的综合分析技术来澄清淋巴管内皮细胞，同时将其与血管内皮细胞进行比较。