レトロウイルス発現ライブラリーを用いた本態性血小板血症の原因遺伝子のクローニング

使用逆转录病毒表达文库克隆导致原发性血小板增多症的基因

基本信息

批准号：
10877158
负责人：
金倉譲
金额：
--
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本態性血小板血症(essential thrombocythemia:ET)は、真性多血症や骨髄線維症と同様に造血幹細胞のクローナルな骨髄増殖性疾患であるがその原因は不明である。ETでは、造血幹(前駆)細胞は刺激因子無添加でもコロニーを形成し易い傾向があり、血小板自体も量的異常の他にも様々な質的異常を伴っている。血小板産生には、トロンボポエチン(TPO)とその受容体-mplが最も重要な役割を果たしていると考えられる。我々はET患者の血清や血小板を用いて、トロンボポエチン(TPO)とその受容体c-mplの異常の有無を検討した結果、ET患者の血小板では血小板膜蛋白GPIIb/IIIaの発現には全く差が認められなにもかかわらず、c-mplの発現がmRNAならびに蛋白レベルともに著明に減少していた。そこで、ET患者よりcDNA発現ライブラリーを作成し、c-mplの発現を低下させることを指標に遺伝子単離を試みている。また、血小板産生機序を解明するため、TPO依存性に増殖分化するヒトインターロイキン3(IL-3)依存性細胞株F-36P-mplを用いて巨核球の増殖分化に必要なc-mpl下流のシグナル伝達系を解析した。その結果、巨核球前駆細胞の増殖にはRasとSTAT5の両者が関与しているこが、巨核球への分化にはRasが長期間(24時間以上)活性化されることが重要であることが明かとなった。

原发性血小板增多症（ET）是一种造血干细胞克隆性骨髓增生性疾病，类似于真性红细胞增多症和骨髓纤维化，但其病因尚不清楚。在ET中，即使不添加刺激因子，造血干（祖）细胞也容易形成集落，而血小板本身除了数量异常外，还存在各种质量异常。血小板生成素（TPO）及其受体-mpl被认为在血小板生成中发挥最重要的作用。我们使用ET患者的血清和血小板调查了血小板生成素（TPO）及其受体c-mpl是否存在异常，发现ET患者的血小板中血小板膜蛋白GPIIb/IIIa的表达没有差异。尽管没有观察到这一点，但c-mpl的表达在mRNA和蛋白质水平上均显着降低。因此，我们创建了 ET 患者的 cDNA 表达文库，并尝试以 c-mpl 表达的减少为指标来分离基因。此外，为了阐明血小板产生机制，我们使用人白细胞介素3（IL-3）依赖性细胞系F-36P-mpl（其以TPO依赖性方式增殖和分化）来研究c-mpl分析了巨核细胞增殖和分化所需的下游信号转导系统。结果表明，尽管Ras和STAT5均参与巨核细胞前体细胞的增殖，但Ras的长期激活（超过24小时）对于分化为巨核细胞是重要的。