c-kitレセプターチロシンキナーゼの恒常的活性化と腫瘍原性に関する研究

c-kit受体酪氨酸激酶组成型激活及致瘤性研究

• 批准号: 08265233
• 负责人: 金倉 譲
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265233/
• 关键词: c-kit; stem cell factor; 活性化変異; 白血病; 造血器腫瘍; チロシンキナーゼ; シグナル伝達

c-kitレセプターチロシンチナーゼ(KIT)は、リガンド(stem cell factor:SCF)依存性に活性化される。このKIT/SCFシステムは、造血幹細胞、マスト細胞、生殖細胞や色素細胞の増殖・分化に必須である。我々は、c-kit遺伝子にリガンドが存在しなくても恒常的に活性化するgain-of function変異が存在することを見いだした。特に、kinase領域のAsp^<816>コドン(マウスではコドン814)は恒常的活性化変異のhot spotであり造血器腫瘍の発症に関与していると考えられる。一般に、KITは二量体化し細胞内にシグナルを伝達することが知られているが、kinase領域内のc-kit変異では細胞外領域におけるダイマー形成は認められなかった。kinase領域に変異によるKITの恒常的活性化や腫瘍化シグナル伝達系における細胞外領域の役割を検討するため、野生型(wild type)KIT^<WT>と恒常的活性化KIT^<Tyr814>の細胞外領域を欠失させたDel(Δ)KIT^<WT>とΔKIT^<Tyr814>を作製し、KIT陰性であるIL-^3依存性細胞株BA/F^3へ導入した。ΔKIT^<WT>導入BA/F^3細胞では、ΔKIT^<WT>のチロシンリン酸化や活性化は認められず、IL-^3非存在下では増殖反応を示さなかった。一方、ΔKIT^<Tyr814>導入BA/F^3細胞では、ΔKIT^<Tyr814>の恒常的活性化が認められ、導入細胞もIL-^3非依存性に増殖した。このΔKIT^<Tyr814>によるIL-^3非依存性増殖は、KIT^<W42>(KITのdominant negative型)によりほぼ完全に抑制された。さらに、ΔKIT^<Tyr814>は、KIT^<WT>やKIT^<W42>と共沈することが明らかとなった。以上の結果より、kinase領域のc-kit変異によるKITの活性化やシグナル伝達系には細胞外領域は必須ではないが、モノマーで作用するものではなく細胞内領域における相互作用が重要であると考えられた。

C-kit 受体酪氨酸酶 (KIT) 以配体（干细胞因子：SCF）依赖性方式激活。该KIT/SCF系统对于造血干细胞、肥大细胞、生殖细胞和色素细胞的增殖和分化至关重要。我们发现 c-kit 基因包含一个功能获得性突变，即使在没有配体的情况下也会不断激活。特别地，激酶区域中的Asp^<816>密码子（小鼠中的密码子814）是组成型激活突变的热点，并且被认为与造血肿瘤的发展有关。众所周知，KIT 二聚化并将信号传递到细胞中，但在激酶区域中的 c-kit 突变中没有观察到细胞外区域的二聚体形成。为了研究激酶区域突变引起的KIT的组成型激活以及胞外结构域在致瘤信号转导系统中的作用，我们研究了野生型KIT^<WT>和组成型激活的KIT^<Tyr814>的作用。我们创建了胞外区域缺失的 Del(Δ)KIT^<WT> 和 ΔKIT^<Tyr814>，并将它们引入 KIT 阴性 IL-^3 依赖性细胞系 BA/F^3 中。在引入ΔKIT^<WT>的BA/F^3细胞中，没有观察到酪氨酸磷酸化或ΔKIT^<WT>的激活，并且在不存在IL-^3的情况下没有观察到增殖反应。另一方面，在导入ΔKIT^<Tyr814>的BA/F^3细胞中，观察到ΔKIT^<Tyr814>的组成型活化，并且转染的细胞也以不依赖于IL-^3的方式增殖。这种由 ΔKIT^<Tyr814> 诱导的不依赖于 IL-^3 的增殖几乎完全被 KIT^<W42>（KIT 的显性失活类型）抑制。另外，可知ΔKIT^<Tyr814>与KIT^<WT>及KIT^<W42>共沉淀。从以上结果可知，虽然由于激酶区域中的c-kit突变，细胞外区域对于KIT和信号转导系统的激活不是必需的，但细胞内区域中的相互作用而不是单体中的相互作用是重要的。被认为。

项目成果

Kanakura,Y.,Ikeda,H.,et al.: "The c-kit receptor tyrosine kinase:its role in hematological malignancies" Cancer J.9. 79-82 (1996)

Kanakura,Y.,Ikeda,H.,et al.：“c-kit 受体酪氨酸激酶：其在血液恶性肿瘤中的作用”Cancer J.9。

松村 到、金倉 譲: "Annual Review 血液 1997" 高久史麿、宮崎澄雄、斎藤英彦、溝口秀昭、坂田洋一編集, 277 (1997)

Itaru Matsumura、Yuzuru Kanekura：“Annual Review Blood 1997”，由 Fumaro Takahisa、Sumio Miyazaki、Hidehiko Saito、Hideaki Mizoguchi 和 Yoichi Sakata 编辑，277 (1997)

Matsumura,I.,Kanakura,Y.,et al.: "The biological properties of human recombinant thrombopoietin in the proliferation and megakaryocytic differentiation of acute myeloblastic leukemia cells" Blood. 88. 3074-3082 (1996)

Matsumura，I.，Kanakura，Y.，等人：“人重组血小板生成素在急性髓细胞白血病细胞增殖和巨核细胞分化中的生物学特性”血液。

Moriyama,Y.,Kanakura,Y.,et al.: "Role of aspartic acid 814 in the function and expression of c-kit receptor tyrosine kinase" J.Biol.Chem.271. 3347-3350 (1996)

Moriyama,Y.,Kanakura,Y.,et al.：“天冬氨酸 814 在 c-kit 受体酪氨酸激酶的功能和表达中的作用”J.Biol.Chem.271。

Kitayama,H.,Kanakura,Y.,et al.: "Neoplastic transformation of normal hematopoietic cells by constitutively activating mutation of c-kit receptor tyrosine kinase" Blood. 88. 995-1004 (1996)

Kitayama, H., Kanakura, Y., et al.：“通过组成性激活 c-kit 受体酪氨酸激酶突变来实现正常造血细胞的肿瘤转化”血液。