c-kitレセプターチロシンキナーゼの恒常的活性化と腫瘍原性に関する研究

c-kit受体酪氨酸激酶组成型激活及致瘤性研究

• 批准号: 08265233
• 负责人: 金倉 譲
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265233/
• 关键词: c-kit; stem cell factor; 活性化変異; 白血病; 造血器腫瘍; チロシンキナーゼ; シグナル伝達

c-kitレセプターチロシンチナーゼ(KIT)は、リガンド(stem cell factor:SCF)依存性に活性化される。このKIT/SCFシステムは、造血幹細胞、マスト細胞、生殖細胞や色素細胞の増殖・分化に必須である。我々は、c-kit遺伝子にリガンドが存在しなくても恒常的に活性化するgain-of function変異が存在することを見いだした。特に、kinase領域のAsp^<816>コドン(マウスではコドン814)は恒常的活性化変異のhot spotであり造血器腫瘍の発症に関与していると考えられる。一般に、KITは二量体化し細胞内にシグナルを伝達することが知られているが、kinase領域内のc-kit変異では細胞外領域におけるダイマー形成は認められなかった。kinase領域に変異によるKITの恒常的活性化や腫瘍化シグナル伝達系における細胞外領域の役割を検討するため、野生型(wild type)KIT^<WT>と恒常的活性化KIT^<Tyr814>の細胞外領域を欠失させたDel(Δ)KIT^<WT>とΔKIT^<Tyr814>を作製し、KIT陰性であるIL-^3依存性細胞株BA/F^3へ導入した。ΔKIT^<WT>導入BA/F^3細胞では、ΔKIT^<WT>のチロシンリン酸化や活性化は認められず、IL-^3非存在下では増殖反応を示さなかった。一方、ΔKIT^<Tyr814>導入BA/F^3細胞では、ΔKIT^<Tyr814>の恒常的活性化が認められ、導入細胞もIL-^3非依存性に増殖した。このΔKIT^<Tyr814>によるIL-^3非依存性増殖は、KIT^<W42>(KITのdominant negative型)によりほぼ完全に抑制された。さらに、ΔKIT^<Tyr814>は、KIT^<WT>やKIT^<W42>と共沈することが明らかとなった。以上の結果より、kinase領域のc-kit変異によるKITの活性化やシグナル伝達系には細胞外領域は必須ではないが、モノマーで作用するものではなく細胞内領域における相互作用が重要であると考えられた。

C-KIT受体酪氨酸酶（试剂盒）以配体（干细胞因子：SCF）依赖性方式激活。该试剂盒/SCF系统对于造血干细胞，肥大细胞，生殖细胞和色素细胞的增殖和分化至关重要。我们发现，即使在C-KIT基因中没有配体的情况下，功能突变也会被组成式激活。特别是，激酶区域中的ASP^<816>密码子（小鼠中的密码子814）是组成型激活突变的热点，被认为与造血肿瘤的发展有关。通常，已知KIT在细胞内二聚和传输信号，但是激酶区域内的C-KIT突变在细胞外区域没有显示二聚体的形成。为了研究细胞外区域在激酶区域的突变以及在肿瘤发生信号系统中的基本激活中的作用，DEL（δ）kit^<wt>和Δkit^<tyr814>产生KIT阴性IL-^3依赖性细胞系BA/f^3。在Δkit^<wt>转导的BA/F^3细胞中，未观察到酪氨酸磷酸化或Δkit^<wt>的激活，并且在没有IL-^3的情况下未观察到增殖反应。另一方面，观察到Δkit^<try814>转导的Ba/f^3细胞，观察到Δkit^<tyr814>的组成型激活，并且转导的细胞也以IL-^3独立的方式增殖。 Kit^<w42>（套件的主要负类型）几乎完全抑制了这种Δkit^<tyr814>的IL-^3独立的增殖。此外，据揭示了Δkit^<tyr814>与kit^<wt>和kit^<w42>共同取代。基于上述结果，人们认为细胞外区域对于通过C-KIT突变在激酶区域和信号转导系统中激活试剂盒并不是必不可少的，但是细胞内区域的相互作用很重要，而不是那些充当单体的相互作用。

项目成果

Kanakura,Y.,Ikeda,H.,et al.: "The c-kit receptor tyrosine kinase:its role in hematological malignancies" Cancer J.9. 79-82 (1996)

Kanakura,Y.,Ikeda,H.,et al.：“c-kit 受体酪氨酸激酶：其在血液恶性肿瘤中的作用”Cancer J.9。

松村 到、金倉 譲: "Annual Review 血液 1997" 高久史麿、宮崎澄雄、斎藤英彦、溝口秀昭、坂田洋一編集, 277 (1997)

Itaru Matsumura、Yuzuru Kanekura：“Annual Review Blood 1997”，由 Fumaro Takahisa、Sumio Miyazaki、Hidehiko Saito、Hideaki Mizoguchi 和 Yoichi Sakata 编辑，277 (1997)

Matsumura,I.,Kanakura,Y.,et al.: "The biological properties of human recombinant thrombopoietin in the proliferation and megakaryocytic differentiation of acute myeloblastic leukemia cells" Blood. 88. 3074-3082 (1996)

Matsumura，I.，Kanakura，Y.，等人：“人重组血小板生成素在急性髓细胞白血病细胞增殖和巨核细胞分化中的生物学特性”血液。

Moriyama,Y.,Kanakura,Y.,et al.: "Role of aspartic acid 814 in the function and expression of c-kit receptor tyrosine kinase" J.Biol.Chem.271. 3347-3350 (1996)

Moriyama,Y.,Kanakura,Y.,et al.：“天冬氨酸 814 在 c-kit 受体酪氨酸激酶的功能和表达中的作用”J.Biol.Chem.271。

Matsumura,I.,Kanakura,Y.,et al.: "Thrombopoietin-induced differentiation of a human megakaryoblastic leukemia cell line CMK involves transcriptional activation of p21^<WAF1/Cip1> by STAT5" Mol.Cell.Biol.(in press). (1997)

Matsumura,I.,Kanakura,Y.,et al.：“血小板生成素诱导的人巨核细胞白血病细胞系 CMK 的分化涉及 STAT5 对 p21^<WAF1/Cip1> 的转录激活”Mol.Cell.Biol.（出版中）