c-kitレセプターチロシンキナーゼの恒常的活性化と腫瘍原性に関する研究

c-kit受体酪氨酸激酶组成型激活及致瘤性研究

基本信息

批准号：
11139235
负责人：
金倉譲
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139235/
关键词：
c-kit チロシンキナーゼ受容体シグナル伝達腫瘍突然変異

项目摘要

c-kitレセプターチロシンキナーゼ(KIT)は、kinasc領域とjuxtamembranc領域の変異により、恒常的に活性化される。c-kit変異による二量体形成、恒常的活性化ならびに増殖シグナル伝達における細胞外領域、細胞膜貫通領域、細胞内チロシンキナーゼ領域の役割を検討するため、(a)juxtamembrane領域に変異を有するc-kit変異(KIT-G559)、kinase領域に変異を有するckit変異(KIT-V814)ならびに野生型c-kit(KIT-WT)の細胞外領域領域を欠失したDel-KITミュータント、(b)細胞外領域ならびに細胞膜貫通領域を欠失させ、細胞内領域とsrc N-terminal myristylation signalを結合させたsrc-KITキメラをそれぞれ作製し、IL-3依存性細胞株へ導入した。導入細胞において、細胞外を欠失させたDel-KIT-G559、Del-KIT一V814とも恒常的なチロシンリン酸化が認められIL-3非依存性増殖を促したが、Del-KIT-WTではほとんどリン酸化が認められず増殖刺激能も認められなかった。一方、src-KIT-G559、src-KIT-V814、src-KIT一WTでは、すべてのキメラともに恒常的リン酸化が認められたが、IL-3非依存性増殖はsrc-KIT-G559とsrc-KIT-V814のみに認められた。さらに、細胞外領域と細胞膜貫通領域を欠失したDel-KIT-G559、Del-KIT-V814、src-KIT-G559、src-KIT-V814は、細胞内領域で野生型KITと会合し共沈した。以上の結果より変異による恒常的活性化や下流へのシグナル伝達には、細胞外領域や細胞膜貫通領域は必須ではないと考えられた。

C-KIT受体酪氨酸激酶（试剂盒）由Kinasc和Jooxtammbranc区域的突变组成性激活。 To investigate the role of extracellular, transmembrane and intracellular tyrosine kinase regions in c-kit mutation, constitutive activation and proliferation signaling, (a) a c-kit mutation with mutation in the juxtamembrane region (KIT-G559), a ckit mutation with mutation in the kinase region (KIT-V814), and a Del-KIT mutant with the extracellular野生型C-KIT（KIT-WT）和（b）具有细胞外区域删除的SRC-KIT嵌合体，以及与SRC N末端肉豆蔻酰化信号结合的细胞内区域，并引入了IL-3依赖性细胞系中。在转导的细胞中，观察到已删除并促进IL-3独立的增殖的Del-Kit-G559和Del-Kit-1V814的组成酪氨酸磷酸化，但Del-Kit-WT却显示很少的磷酸化和没有增殖刺激能力。另一方面，在SRC-KIT-G559，SRC-KIT-V814和SRC-KIT-1WT的所有嵌合体中都观察到本构磷酸化，但是仅在SRC-KIT-KIT-G559和SRC-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-KIT-1WT中观察到IL-3独立的生长。此外，已在细胞外和跨膜区域中删除的Del-Kit-G559，Del-Kit-G559，Del-Kit-v814，SRC-KIT-G559和SRC-KIT-V814与细胞外和跨膜区域中已删除。基于上述结果，人们认为细胞外和跨膜区域对于突变和下游信号传导的本构激活不是必不可少的。