活性型STATsの誘導発現による造血幹細胞の増幅とその分子機構の解析

活性STATs诱导表达造血干细胞扩增及其分子机制分析

基本信息

批准号：
12877158
负责人：
金倉譲
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

STAYsは、インターロイキン、エリスロポエチン、トロンボポエチン、G-CSFなどの造血因子やEGFなどの増殖因子の細胞内シグナル伝達に関わる重要な分子の一つである。現在までの検討によりSTAT3はc-mycやサイクリンD1などの発現誘導を介して細胞増殖を誘導し、同時にBcl-2やBcl-XLなどの発現を制御することにより細胞のアポトーシスを阻害することが明らかにされている。我々は、ユビキチンが造血幹細胞の増殖を抑制することを見い出していたが、この作用がユビキチンがプロテアソーム依存性にSTAT3を崩壊させ血液細胞の増殖抑制やアポトーシスを引き起こすことを見い出し、造血細胞におけるSTAT3の重要性を明らかにした。さらに、我々は、がん遺伝子v-Srcによる腫瘍性増殖にも、rasばかりでなくSTAT3がサイクリンD2、サイクリンE、c-mycの発現を誘導し、腫瘍性増殖に関与していることを明らかにした。我々は、すでにSTAT1,3,5,6のfull-length cDNAの3'末端に合成型エストロゲン受容体のリガンド結合領域を融合させたキメラ分子の発現ベクターの作成を完了し、STAT1,3,5,6と合成型エストロゲン受容体のキメラ分子は、そのリガンドである4-OH tamoxifenの刺激に反応して各STATの認識配列を組み込んだルシフェラーゼのreporter geneを活性化することを明らかにしている。現在、マウス骨髄細胞にSTAT1/ER、STAT3/ER、STAT5/ER、STAT6/ERを発現するretrovirusを感染させた後、4-OH tamoxifen単独存在下あるいは各種の造血因子と併用下で培養し、造血幹細胞の増幅について検討中である。

STAY 是参与造血因子（如白细胞介素、促红细胞生成素、血小板生成素和 G-CSF）以及生长因子（如 EGF）的细胞内信号转导的重要分子。迄今为止的研究表明，STAT3通过诱导c-myc和cyclin D1的表达来诱导细胞增殖，同时通过调节Bcl-2和Bcl-XL的表达来抑制细胞凋亡。我们之前发现泛素会抑制造血干细胞的增殖，但我们还发现泛素以蛋白酶体依赖性方式破坏STAT3，导致血细胞增殖抑制和凋亡，阐明了其重要性。此外，我们发现不仅 ras，STAT3 也诱导细胞周期蛋白 D2、细胞周期蛋白 E 和 c-myc 的表达，并参与由癌基因 v-Src I 引起的肿瘤生长。我们已经完成了嵌合分子表达载体的创建，其中合成雌激素受体的配体结合区融合到STAT1、3、5、6全长cDNA的3'端。研究表明， ,6 和合成雌激素受体的嵌合分子会激活荧光素酶报告基因，该基因包含每个 STAT 的识别序列，以响应其配体 4-OH 他莫昔芬的刺激。目前，小鼠骨髓细胞被表达STAT1/ER、STAT3/ER、STAT5/ER和STAT6/ER的逆转录病毒感染，然后在单独的4-OH他莫昔芬或与各种造血因子组合的存在下培养。目前正在研究造血干细胞的扩增。