骨髄由来巨核球におけるトロンボポエチン受容体発現調節機構の解析

骨髓源性巨核细胞血小板生成素受体表达调控机制分析

基本信息

批准号：
13771085
负责人：
春原正隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The Nippon Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771085/
关键词：
TPO c-mpl CMK megakaryocyte promoter receptor c-Mpl PKC

项目摘要

米国ジェネンテイック社より特別に分与されたTPOにてCMK細胞の分化誘導を行い、細胞表面上TPO受容体(c-Mpl)の発現とプロテインキナーゼC(PKC)の役割について検討いたしましたところ以下の結果を得ました。各種PKC-isoformの局在およびTPO分化誘導時におけるその局在の変化は、共焦点レーザー顕微鏡による解析およびウェスタンブロッチング法による定量的解析を行った結果、PKC-isoformの局在パターンにはバリエーションが認められ、数種類のPKC-isoformにおきましてはTPO分化誘導の前後でその局在の変化が認められておりますまた、TPO分化誘導時におけるc-Mpl、c-mpl mRNA、c-mplプロモーター活性の経時的変化の相関を解析検討いたしましたところ、TPO処理後3時間において細胞表面上c-Mplの急速なダウンレギュレーションが認められ、c-mpl mRNA発現量の経時的変化に関しましてはTPO処理後6時間より増加傾向を示し、処理後9時間で最大となり以降TPO処理前の発現量に回復することを確認しております。そして、c-mplプロモーター活性の経時的変化に関しましては、TPO処理後24時間で最大となり、このプロモーター活性の上昇は各種PKC阻害剤により抑制されることが判明いたしました。一方、PMA処理により、c-mplプロモーター活性が上昇することも確認されております。従いまして、本研究によりTPO受容体(c-Mpl)の発現がPKCにより制御されている可能性が示唆されました(Cell.Mol.Biol.,49,Online,393-398,2003,Sunohara M et al.)本研究は、c-Mpl発現調節機構解明の一助となり、最終的には血小板造血機構解明に寄与する研究であったものと考えられます。

我们利用美国Genetic公司专门提供的TPO诱导CMK细胞分化，并研究了细胞表面TPO受体（c-Mpl）的表达以及蛋白激酶C（PKC）的作用，得到了结果。通过共聚焦激光显微镜和蛋白质印迹定量分析，分析了各种PKC同工型的定位及其在诱导TPO分化时的定位变化，结果表明PKC同工型的定位模式存在差异。，在 TPO 分化诱导之前和之后观察到几种类型 PKC 同种型的定位变化。当我们分析mRNA和c-mpl启动子活性随时间变化的相关性时，我们发现在TPO处理后3小时，c-Mpl在细胞表面迅速下调，并且c-mpl mRNA表达水平随时间变化。证实表达水平从TPO处理后6小时开始呈增加趋势，在处理后9小时达到最大值，然后恢复到TPO处理前的表达水平。关于c-mpl启动子活性随时间的变化，发现在TPO处理后24小时达到最大值，并且这种启动子活性的增加被各种PKC抑制剂抑制。另一方面，已经证实PMA处理增加了c-mpl启动子活性。因此，本研究提示 TPO 受体（c-Mpl）的表达可能受 PKC 的调节（Cell. Mol. Biol., 49, Online, 393-398, 2003, Sunohara M (et al.)）。有助于阐明c-Mpl表达的调控机制，并最终有助于阐明血小板造血机制。