白血病に関わる染色体転座部位の構造解析による転座メカニズム研究

白血病相关染色体易位位点结构分析研究易位机制

基本信息

批准号：
08671225
负责人：
直江知樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

治療関連二次性白血病の発症メカニズムを研究する目的で、治療関連二次性急性前骨髄球性白血病(T-sAPL)での染色体転座t(15;17)におけるPMLおよびRARA遺伝子切断点を解析し、de novo APLでの切断点と比較した。対象はJALSGおよび厚生省白血病治療班に登録された成人de novo APL120例およびランゲルハンス細胞組織球症(LCH)診断後、T-sAPLを発症した4例(男1例、女3例、平均年齢3.1歳)で、いずれもt(15;17)転座を有していた。LCHからT-sAPL発症までの期間は3〜8.5年でVP16総投与量4.8〜50.0g/m^2であった。de novo APLではPML遺伝子切断部位は約30%がイントロン3に、約70%がイントロン6・エクソン6に存在し、RARA遺伝子切断部位はすべてイントロン2存在した。8例においてder(15)およびder(17)の連結領域をシークエンスしたところ、共通する塩基モチーフを見出すことは困難であった。しかし、半数以上の連結部位においてPML遺伝子とRARA遺伝子が1〜7塩基を共有していることから、再結合モデルとして、非特異的なDNA二重鎖切断に続いて突出した一本鎖DNAどうしのペアリングが起きてDNAの結合に進む過程が考えられた。一方、T-sAPLの4症例の切断点は、サザンプロットの結果いずれもPML遺伝子のイントロン6、RARA遺伝子のイントロン2(EcoR1-BamH1の1.1kb)にあると予想された。つぎにPCRを行い切断領域を含むRARA-PMLおよびPML-RARA融合遺伝子のクローニングを行なった。その結果、4例とも約5.5kbのDNA増幅され、Eco R1で処理したところ、3.5kb、0.7kb、0.3kbの共通なbandの他に1.0〜2.1kbの異なる大きさのbandが検出された。各症例のder(15)のシークエンスが終了し、現在der(17)及びRARA遺伝子ゲノムクローンのシークエンスを行っているが、これまでのシークエンスでは転座部位に共通する塩基モチーフを見出すことは困難であったが、T-sAPLの発症メカニズムはde novo APLとは異なると考えられた。

为了研究与治疗相关的二次白血病的发展的机制，我们在染色体易位T（15; 17）中分析了与治疗相关的急性急性临床前临床白血病（T-SAPL）的PML和RARA基因断点，并将其与Novo Apl的那些进行了比较。受试者是在JALSG和卫生，劳动和福利性白血病治疗团队中注册的120名成年人APL，四例（1名男性，3名女性，平均3.1岁）在诊断为Langerhans细胞组织细胞增多症（LCH）后患有T-SAPL，所有这些病例都有T（15; 15; 17; 17; 17; 17; 17; 17; 17; 17）。从LCH到T-SAPL发作的持续时间为3 - 8。5年，VP16的总剂量为4.8-50.0 g/m^2。在从头APL中，内含子3和外显子6中存在约30％的PML基因裂解位点，并且内含子6和外显子6中存在约70％，并且所有RARA基因裂解位点都存在于内含子2中。当DER（15）和DER（17）的链接区域在8个案例中进行了测序时，很难在8例中进行序列。但是，由于PML基因和RARA基因在超过一半的连锁位点具有1至7个碱基，因此，重组模型被认为涉及非特异性DNA双链断裂，然后将其伸出的单链DNA对配对，从而导致DNA结合。另一方面，在南部图中预测四个T-SAPL病例的断点为PML基因的内含子6和RARA基因的内含子2（ECOR1-BAMH1）。接下来，进行PCR以克隆RARA-PML和含有裂解区域的PML-RARA融合基因。结果，所有四个病例均已扩增约5.5 kb的DNA并用ECO R1处理，除了3.5 kb，0.7 kb和0.3 kb的常见带外，还检测到不同尺寸为1.0至2.1 kb的带带。每种情况的DER（15）序列已完成，目前正在测序DER（17）和RARA基因组克隆。尽管在先前序列中很难在易位位点找到一个共同的基础基序，但t-SAPL的发展机理被认为与从头apl不同。