トポイソメラーゼI阻害剤による放射線効果増強のメカニズムに関する研究

拓扑异构酶I抑制剂增强放疗效果的机制研究

基本信息

批准号：
08671021
负责人：
笹井啓資
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671021/
关键词：
p53 トポイソメラーゼI阻害剤 CPT-11 SN-38 コメットアッセイ

项目摘要

細胞におけるP53ステ-タスの放射線とトポイソメラーゼI阻害剤CPT-11の活性代謝産物SN-38との併用効果に対する影響について検討した。細胞はp53ノックアウトマウス由来線維芽細胞およびこれにwild type p53導入した細胞を用いた。対数増殖期の細胞を200nMのSN-38に照射前30分、照射中および照射後2時間暴露し、その後コロニー法で生存細胞数を求め、薬剤溶解液(DMSO)のみを暴露したものと比較検討した。p53ノックアウトマウス由来の線維芽細胞ではSN38および放射線の併用効果はわずかしか認められなかったが、wild type p53を導入した細胞では著明な併用効果が認められ、p53のステ-タスが併用効果に影響することが分かった。次にComet Assay法を用いて個々の細胞のDNA障害の程度を求めた。放射線照射後の上記の細胞をアガロースゲル内に包埋後細胞を溶解し電気泳動した。障害を受けたDNAが泳動され、一方未障害のDNAは泳動されないためDNAを蛍光色素で発色させるとあたかも彗星のような形態が個々の細胞に対応して観察された。SN38と放射線の併用症例では彗星の尾部モーメントが明らかに増大し、DNAの障害が増加していることが明らかになった。これは、微小核形成試験を用いて得られた染色体レベルの障害の増加を支持するデータである。動物実験は、昨年度の研究でin vitro試験でCPT-11と放射線の併用効果が僅かに認められたマウス可植EMT6腫瘍を用いin vivo-in vitroコロニー形成試験を用いて行った。しかし、1回投与(40mg/kg)1回照射(10-20Gy)、および3回投与(40mg/kg X 3回)3回照射(6Gy X 3回)いずれの場合にも明らかな併用効果が認められなかった。結論 1)SN-38による放射線増感効果はwild type p53を有する細胞で認められるが、wild type p53を有さない細胞では僅かであった。2)SN38の放射線増感効果はDNAの障害の増加が原因と考えられた。

研究了p53状态对辐射和拓扑异构酶I抑制剂CPT-11与活性代谢物SN-38在细胞中的影响。细胞是源自p53基因敲除小鼠的成纤维细胞，以及已引入野生型p53的成纤维细胞的细胞。对数生长阶段中的细胞在照射前30分钟，在辐照过程中和辐照后2小时暴露于200 nm SN-38，然后使用菌落方法确定活细胞的数量，并与仅暴露于药物裂解物（DMSO）相比。尽管SN38的作用只有很小的作用和源自p53敲除小鼠的成纤维细胞的辐射，但使用野生型p53引入的细胞具有重大作用，并且发现p53状态影响了组合的效果。然后使用彗星测定法确定单个细胞中DNA损伤的程度。辐射照射后，将上述细胞嵌入琼脂糖凝胶中，并将细胞裂解并电泳。运行受损的DNA，而未损坏的DNA未运行，因此，当用荧光染料开发DNA时，在与单个细胞的对应中观察到了彗星样形态。据显示，与SN38和辐射结合使用，彗星的尾部力矩显着增加，并且DNA损伤增加了。这是支持使用微核研究获得的染色体水平疾病增加的数据。在去年的研究中，使用小鼠植入的EMT6肿瘤使用小鼠植入的EMT6肿瘤对动物实验进行了体外体外菌落形成测试，这对CPT-11和辐射的组合在去年的研究中对CPT-11和辐射的组合产生了略有影响。但是，在一种剂量（40 mg/kg）辐射（10-20 Gy）和三剂（40 mg/kg x 3剂量）辐射（6GY x 3剂量）中均未观察到明显的组合效应。结论1）在野生型p53的细胞中观察到SN-38的辐射敏化作用，但在没有野生型p53的细胞中很小。 2）认为SN38的辐射敏化作用是由DNA损伤增加引起的。